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2010.3,吳曉英,超微結(jié)構(gòu)基本知識(shí),一 、取材、樣品制備與課題設(shè)計(jì)密切相關(guān),取材前要問幾個(gè)問題: a 所要研究對(duì)象的解剖位置是否清楚?如海馬….腎小球病變. b 要觀察樣品的外部還是內(nèi)部結(jié)構(gòu)？＿取材和固定前的處理不同（ＴＥＭ／ＳＥＭ），如腸上皮、牙齒髓腔的觀察．．． c 是定量還是定性？ d 有橫/縱向之分嗎? 肌肉﹑神經(jīng)等,１.取材或固定要與課題設(shè)計(jì)的目的一致,２. 取材、固定,組織取材: 大小(1X1X5mm3)、部位(與要觀察的對(duì)象有關(guān)) 原則:保證樣品的超微結(jié)構(gòu)不受損傷及細(xì)胞原有的定位. 注意事項(xiàng):⑴切取組織動(dòng)作要迅速; ⑵低溫操作; ⑶取材用的刀具要鋒利; ⑷組織塊要切小; ⑸部位要準(zhǔn)確可靠. (6)做好文案工作:標(biāo)本編號(hào)、各項(xiàng)相關(guān)資料等,3.各類標(biāo)本的取材,①實(shí)體組織標(biāo)本的收集,手術(shù)標(biāo)本,穿刺標(biāo)本,,②細(xì)胞標(biāo)本的收集,體液游離細(xì)胞:血液、尿液等(抗凝/防溶血),培養(yǎng)細(xì)胞的收集,常規(guī)包埋法,原位包埋法,,,培養(yǎng)細(xì)胞:量的多少能做(培養(yǎng)瓶\孔板)；一般1mm3即可，１２或２４孔均可做ＴＥＭ／ＳＥＭ，其方法不同．ＳＥＭ細(xì)胞可更少．,固定: 2.5%-3%的戊二醛或多聚甲醛混合固定液. 灌注固定_好 浸泡固定,體液：血、骨髓液、精液等的取材方法特殊性,ＰＨ 溫度 時(shí)間,二、超微結(jié)構(gòu)觀察與研究中值得注意的問題,1 、局部與整體的關(guān)系: EM下:極小的一部分,超薄切片獲得的樣品厚度只有一個(gè)細(xì)胞的幾百分之一……必須同時(shí)進(jìn)行大體和組織學(xué)的觀察,才能獲得全面的資料. 2 、靜態(tài)和動(dòng)態(tài)的關(guān)系:在常規(guī)電鏡技術(shù)中,不能觀察活細(xì)胞,故細(xì)胞結(jié)構(gòu)是瞬間靜態(tài)的圖象,實(shí)際上,細(xì)胞是運(yùn)動(dòng)和變化,細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)也是動(dòng)態(tài)的.防止單純的形態(tài)描述。,3.半薄切片:補(bǔ)充上述缺陷. 生物樣品的普通石蠟切片厚度為5微米左右,其觀察深度遠(yuǎn)比超薄切片為大,即在石蠟切片和超薄切片之間不僅有觀察范圍大小的區(qū)別,也有觀察厚度大小的顯著差異.半薄切片厚度為1微米左右,一方面可為超薄切片定位,以選取電鏡下觀察部位,另一方面可供光鏡觀察標(biāo)本的整體面貌. 通過LM 觀察半薄切片可以檢見通常在石蠟切片難以檢見的形態(tài)結(jié)構(gòu),并據(jù)此可做出診斷.因?yàn)橹谱靼氡∏衅牟牧虾图夹g(shù)操作過程不同于石蠟切片,而切片又較普通石蠟切片為薄,故其中某些組織成分得以較好保存和得以顯示,有利于診斷.,4.電子顯微鏡的分辨本領(lǐng)雖已遠(yuǎn)勝于光學(xué)顯微鏡，但電鏡因需在真空條件下工作，所以很難觀察活的生物，而且電子束的照射也會(huì)使生物樣品受到輻照損傷。其他的問題，如電子槍亮度和電子透鏡質(zhì)量的提高等問題也有待繼續(xù)研究。,三、幾類常見細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)特征及鑒定,細(xì)胞是構(gòu)成人體最基本的功能單位，人體的細(xì)胞有兩百多種，其結(jié)構(gòu)不同，功能不同結(jié)構(gòu)與功能相聯(lián)系，每種細(xì)胞、組織和器官都有一定的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。這些特點(diǎn)往往是它們行使一定功能的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，兩者密切相關(guān)。,如：分泌蛋白質(zhì)的腺細(xì)胞富有粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體，巨噬細(xì)胞則有較多的溶酶體；構(gòu)成肌組織的肌細(xì)胞，形態(tài)細(xì)長(zhǎng)，含有大量縱行肌絲，是細(xì)胞收縮的物質(zhì)基礎(chǔ)；上皮組織則細(xì)胞排列緊密，具有吸收和保護(hù)等功能相關(guān)結(jié)構(gòu)。又如消化管是連續(xù)的管道，而食管、胃、小腸和大腸的粘膜又各有特點(diǎn)，它們與各段的相應(yīng)功能相關(guān)。因此，結(jié)構(gòu)與功能相結(jié)合既能達(dá)到深入理解，融會(huì)貫通．,１．神經(jīng)元,神經(jīng)組織由神經(jīng)細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞構(gòu)成。神經(jīng)細(xì)胞即為神經(jīng)元，是神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)功能單位，可接受刺激，傳遞信息，有的還有內(nèi)分泌功能。神經(jīng)膠質(zhì)起支持、營養(yǎng)、保護(hù)作用。 突分兩類， 即軸突(axon)和樹突(dendrite)，大多數(shù)神經(jīng)元具有多個(gè)樹突，每個(gè)樹突都較短，分支較多，可擴(kuò)大接受信息面積。 樹突小分支表面有大量的細(xì)刺狀突起，稱為棘突或棘刺（spine）。 神經(jīng)細(xì)胞（neuron）細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有豐富粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及發(fā)達(dá)的高爾基體，細(xì)胞核大，常染色質(zhì)及核仁均明顯。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與核糖體成片，異染色質(zhì)少單個(gè)核仁均明顯。,大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞，胞核大，核常染色質(zhì)及染色質(zhì)間顆粒（黑“↑”）明顯， 核仁大（白“▲”）。 14000,大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞，胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（黑“↑”）豐富， 高爾基體（黑“▲”）發(fā)達(dá)，細(xì)胞周邊可見突觸（白“↑”）。20000,人腦白質(zhì)中少突膠質(zhì)細(xì)胞，核及細(xì)胞均略呈橢圓形，核相對(duì)較大， 胞質(zhì)少，核糖體較多，其他細(xì)胞器少，鄰近為神經(jīng)氈。16000,２．血管內(nèi)皮細(xì)胞,內(nèi)皮為襯貼于血管腔單層扁平上皮。內(nèi)皮細(xì)胞長(zhǎng)軸多與血液流動(dòng)方向一致，細(xì)胞核居中，核所在部位略隆起，細(xì)胞基底面附著于基板上。電鏡觀察，可見內(nèi)皮細(xì)胞腔面有稀疏而大小不一的胞質(zhì)突起，表面覆以厚約30～60nm的細(xì)胞衣，相鄰細(xì)胞間有緊密連接和縫隙連接及10～20nm的間隙。內(nèi)皮細(xì)胞核淡染，以常染色質(zhì)為主，核仁大而明顯。在胞質(zhì)內(nèi)有發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。,內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的主要特點(diǎn)是胞質(zhì)中有豐富的吞飲小泡，或稱質(zhì)膜小泡（plasmalemmal vesicle），直徑60～70nm（圖）。這些小泡是由細(xì)胞游離面或基底面的細(xì)胞膜內(nèi)凹形成，然后與細(xì)胞膜脫離，經(jīng)細(xì)胞質(zhì)移向?qū)γ?，又與細(xì)胞膜融合，將小泡內(nèi)所含物質(zhì)放出，故小泡有向血管內(nèi)外輸物質(zhì)的作用，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)還可見成束的微絲和一種外包單位膜的桿狀細(xì)胞器，長(zhǎng)約3μm直徑0.1～0.3μm，內(nèi)有6～26條直徑約15nm左右的平行細(xì)管，稱Weibel-Palade小體（W-P小體）W-P小體是內(nèi)皮細(xì)胞特有的細(xì)胞器，一般認(rèn)為它是合成和儲(chǔ)存與凝血有關(guān)的第Ⅷ因子相關(guān)抗原（factor Ⅷ related antigen, F Ⅷ）的結(jié)構(gòu)（圖）,３上皮細(xì)胞,上皮組織（epithelial tissue）由密集的細(xì)胞組成，細(xì)胞形狀較規(guī)則，細(xì)胞間質(zhì)很少，大部分上皮覆蓋于身體表面和襯貼在有腔器官的腔面 上皮組織的細(xì)胞呈現(xiàn)明顯的極性（polarity），即細(xì)胞的兩端在結(jié)構(gòu)和功能上具有明顯的差別。 上皮細(xì)胞表面的特化結(jié)構(gòu):游離面特殊結(jié)構(gòu)(微絨毛與纖毛)。上皮細(xì)胞側(cè)面的連接(緊密連接、中間連接、橋粒、縫隙連接、連接復(fù)合體)。上皮細(xì)胞基底面的結(jié)構(gòu)(基膜、質(zhì)膜內(nèi)褶、半橋粒)。,人皮膚鱗狀上皮細(xì)胞，胞質(zhì)內(nèi)有豐富的張力原纖維（白“↑”）， 細(xì)胞間有橋粒（黑“↑”）。20000,兔輸卵管纖毛柱狀上皮， 可見纖毛柱狀細(xì)胞（黑“▲”）及漿液粘液分泌細(xì)胞（白“▲”）。,腸粘膜上皮細(xì)胞間可見高腳杯狀粘液分泌細(xì)胞（黑“↑”），核小（白“↑”），在基底處。 5000,人胃粘膜上皮中神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞，胞質(zhì)內(nèi)可見大量神經(jīng)內(nèi)分泌顆粒，細(xì)胞間可見橋粒（黑“↑”）。6000,4.肌細(xì)胞,依椐肌細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能和分布，肌肉組織分三種類： 平滑?。骸窦?xì)胞呈梭狀 ●無橫紋 ●不受意志支配（不隨?。?骨骼肌:具橫紋 ●肌肉收縮受意志支配，又稱隨意肌●收縮力 強(qiáng)，易疲勞 心肌 :具橫紋 ,肌原纖維粗細(xì)差別很大，介于0.2～2.3微米之間；同時(shí)，粗的肌原纖維與細(xì)的肌原纖維可相互移行，相鄰者又彼此接近以致分界不清。,免輸卵管肌壁平滑肌細(xì)胞，胞質(zhì)內(nèi)可見密布肌細(xì)絲,少量密體（黑“▲”）及密斑（黑“↑”）,質(zhì)膜外有基板，細(xì)胞間有連接。30000,細(xì)胞內(nèi)可見線粒體（黑“▲”）及肌原纖維，肌節(jié)（黑“↑”）中Ａ帶、Ｉ帶、Ｈ帶及Ｚ線、Ｍ線都清楚可見。 Ｘ 33000,豚鼠心肌細(xì)胞，可見線粒體（黑“▲”）、肌原纖維（黑“↑”）、Ｔ管（白“↑”）及肌漿網(wǎng)（白“▲”）。 21000,5．腫瘤細(xì)胞,腫瘤的基本結(jié)構(gòu)不管什么腫瘤，都由主質(zhì)和間質(zhì)兩部分構(gòu)成。 腫瘤不伺，主質(zhì)成份也不同，實(shí)際上主質(zhì)也就是腫瘤細(xì)胞。,低分化,異常分化,侵潤性生長(zhǎng)、破壞正常細(xì)胞,與蛋白質(zhì)合成有關(guān)的結(jié)構(gòu)十分發(fā)達(dá),細(xì)胞外形異常,細(xì)胞排列紊亂極性消失,細(xì)胞核形態(tài)異常,細(xì)胞器形態(tài)異常,鼻咽癌未分化型，癌細(xì)胞大小形狀不一，僅見個(gè)別原始連接（黑“↑”）。 6000,小腦髓母細(xì)胞瘤 瘤細(xì)胞大小形狀不一。10000,鼻咽癌，癌細(xì)胞大小不一，形態(tài)各異，胞質(zhì)中可見較多粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及張力原纖維（黑“↑”）。 10000,皮膚鱗癌 癌細(xì)胞形態(tài)怪異，胞質(zhì)中有豐富張力原纖維（白“↑”），細(xì)胞間橋粒少（黑“↑”）。 12000,間變型室管膜瘤，瘤細(xì)胞及核大小、形狀差異很大。 6000,謝 謝 ！,