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考點71 微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用 1．培養(yǎng)基 （1）概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。 （2）營養(yǎng)組成：一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。此外，還需要滿足微生物生長對pH、氧氣以及特殊營養(yǎng)物質(zhì)的要求。 （3）種類：按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。 2．無菌技術(shù) （1）含義：指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。 （2）關(guān)鍵：防止外來雜菌的入侵。 （3）不同對象的無菌操作方法(連線) 3．大腸桿菌的純化培養(yǎng) （1）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 ①操作步驟 →→→→ ②倒平板的方法及注意事項 a．請用文字和箭頭寫出正確的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。 b．甲、乙、丙中的滅菌方法是灼燒滅菌。 c．丁中的操作需要等待平板冷卻凝固才能進(jìn)行。 （2）純化大腸桿菌的方法 ①純化培養(yǎng)原理：想方設(shè)法在培養(yǎng)基上得到由一個細(xì)菌繁殖而來的肉眼可見的菌落，即可獲得較純的菌種。 ②純化大腸桿菌的關(guān)鍵步驟是接種。 ③常用的微生物接種方法有兩種 a．平板劃線法：是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。 b．稀釋涂布平板法：是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。 系列稀釋操作(如圖所示)： 涂布平板操作(如圖所示)： （3）菌種的保存方法 ①對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法。 ②對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。 4．土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù) （1）分離原理：土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因為它們能合成脲酶，這種物質(zhì)在把尿素分解成無機(jī)物的過程中起到催化作用。 （2）統(tǒng)計菌落數(shù)目：統(tǒng)計樣品中的活菌一般用稀釋涂布平板法。 （3）實驗流程：土壤取樣→樣品的稀釋→微生物的培養(yǎng)與觀察→細(xì)菌的計數(shù)。 5．分解纖維素的微生物的分離 （1）纖維素酶 ①組成：纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。 ②作用 纖維素C1酶纖維二糖葡萄糖 （2）纖維素分解菌的篩選 ①原理 ②篩選方法：剛果紅染色法，即通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。 ③培養(yǎng)基：以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。 ④實驗流程 考向一 培養(yǎng)基及其制備方法分析 1．下表為某培養(yǎng)基的配方，下列敘述正確的是 成分 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4 伊紅 美藍(lán) 蒸餾水 含量 10 g 10 g 2 g 0.4 g 0.065 g 1 000 mL A．從物理性質(zhì)看該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，從用途看該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基 B．該培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨 C．該培養(yǎng)基缺少提供生長因子的物質(zhì) D．該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的pH后就可以接種使用 【參考答案】B 解題必備 1．培養(yǎng)基的配制原則 （1）目的要明確：配制時應(yīng)根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類。 （2）營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。 （3）pH要適宜：細(xì)菌為6.5～7.5，放線菌為7.5～8.5，真菌為5.0～6.0，培養(yǎng)不同微生物所需pH不同。 2．微生物對主要營養(yǎng)物質(zhì)的需求特點 不同種類的微生物代謝特點不同，因此對培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的需求也不同。 （1）自養(yǎng)型微生物所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)是無機(jī)鹽，碳源可來自大氣中的CO2，氮源可由含氮無機(jī)鹽提供。 （2）異養(yǎng)型微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)主要是有機(jī)物，即碳源必須由含碳有機(jī)物提供，氮源也主要是由有機(jī)物提供，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無機(jī)氮源。 2．如下表所示為培養(yǎng)某種微生物的培養(yǎng)基的配方，請回答： 成分 NaNO3 K2HPO4 MgSO47H2O FeSO4 (CH2O) 瓊脂 H2O 含量 3 g 1.5 g 0.5 g 0.01 g 30 g 10 g 1 000 mL （1）依物理性質(zhì)，該培養(yǎng)基屬于__________培養(yǎng)基。 （2）根據(jù)培養(yǎng)基原料，所培養(yǎng)微生物的同化作用類型是_________。 （3）該培養(yǎng)基中的碳源是__________。 （4）不論何種培養(yǎng)基，在配好之后倒平板之前都要先進(jìn)行的_________；倒平板時，一般需冷卻至________左右，并在___________________操作。 （5）若用該培養(yǎng)基培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)除去物質(zhì)____________，并加入物質(zhì)________ 【答案】（1）固體 （2）異養(yǎng)型 （3）(CH2O) （4）滅菌 50 ℃ 酒精燈附近 （5）NaNO3 尿素 考向二 無菌技術(shù)的操作 3．無菌技術(shù)包括以下幾個方面的敘述，其中正確的是 A．紫外線照射前，適量噴灑石碳酸等消毒液，可以加強(qiáng)消毒效果 B．高壓滅菌加熱結(jié)束時，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋 C．為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落 D．在微生物接種的實驗中，用95%酒精對實驗者的雙手和超凈工作臺進(jìn)行消毒 【參考答案】A 【試題解析】用紫外線照射30 min，可以殺死物體表面或空氣中的微生物，在照射前，適量噴灑石碳酸等消毒液，可以加強(qiáng)消毒效果，A正確；高壓滅菌加熱結(jié)束時，待壓力表指針回到零后，才能開啟鍋蓋，不能打開放氣閥使壓力表指針回到零，B錯誤；為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌、冷卻后才可以快速挑取菌落，C錯誤；在微生物接種的實驗中，一般用75%酒精對實驗者的雙手進(jìn)行消毒，用紫外線照射30 min對超凈工作臺進(jìn)行滅菌，D錯誤。 解題技巧 消毒和滅菌的辨析 項目 條件 結(jié)果 常用方法 應(yīng)用范圍 消毒 較為溫和的物理或化學(xué)方法 僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分對人體有害的微生物 煮沸消毒法 日常用品 巴氏消毒法 不耐高溫的液體 化學(xué)藥劑消毒法 用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源 滅菌 強(qiáng)烈的理化因素 殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼燒滅菌法 接種工具 干熱滅菌法 玻璃器皿、金屬工具 高壓蒸汽滅菌法 培養(yǎng)基及容器的滅菌 4．細(xì)菌培養(yǎng)過程中分別采用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理，這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌 A．接種環(huán)、手、培養(yǎng)基 B．高壓鍋、手、接種環(huán) C．培養(yǎng)基、手、接種環(huán) D．接種環(huán)、手、高壓鍋 【答案】C 考向三 大腸桿菌的純化方法及過程分析 5．下圖中甲是稀釋涂布平板法中的部分操作，乙是平板劃線法的操作結(jié)果。 下列敘述中錯誤的是 A．甲中涂布前要將涂布器灼燒，冷卻后才能取菌液 B．對于濃度較高的菌液，如甲中的稀釋倍數(shù)僅為102，則所得的菌落不一定是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成 C．乙培養(yǎng)皿中所得的菌落都符合要求 D．乙中的連續(xù)劃線的起點是上一次劃線的末端 【參考答案】C 歸納整合 兩種純化細(xì)菌方法的比較 項目 優(yōu)點 缺點 適用范圍 平板劃線法 可以觀察菌落特征，對混合菌進(jìn)行分離 不能計數(shù) 適用于好氧菌 稀釋涂布平板法 可以計數(shù)，可以觀察菌落特征 吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延 適用于厭氧菌和兼性厭氧菌 6．下圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法，請回答相關(guān)問題。 （1）圖甲是利用________法進(jìn)行微生物接種，圖乙是利用__________________法進(jìn)行微生物接種。這兩種方法所用的接種工具分別是________和________；對這兩種接種工具進(jìn)行滅菌和消毒的方法依次是________和酒精消毒。 （2）接種操作為什么一定要在火焰附近進(jìn)行？________________________________________________。 （3）接種后，在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)細(xì)菌時為什么進(jìn)行倒置培養(yǎng)？________________________________。 （4）如圖是采用上述接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解，其接種方法是________(填“圖甲”或“圖乙”)。 【答案】（1）平板劃線 稀釋涂布平板 接種環(huán) 涂布器 灼燒滅菌 （2）火焰附近存在著無菌區(qū)域 （3）避免培養(yǎng)過程產(chǎn)生的水分影響微生物的生長 （4）圖乙 考向四 選擇培養(yǎng)基成分及配制方法的分析 7．選擇培養(yǎng)基是根據(jù)某一種或某一類微生物的特殊營養(yǎng)要求或?qū)σ恍┪锢?、化學(xué)抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基。利用這種培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。為選擇酵母菌和硝化細(xì)菌，應(yīng)選用的培養(yǎng)基分別為 A．伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、含青霉素培養(yǎng)基 B．含青霉素培養(yǎng)基、含氨的無機(jī)培養(yǎng)基 C．含氨的無機(jī)培養(yǎng)基、含青霉素培養(yǎng)基 D．含青霉素培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基 【參考答案】B 技法提煉 選擇培養(yǎng)基的制作方法 （1）在培養(yǎng)基全部營養(yǎng)成分具備的前提下，加入物質(zhì)：依據(jù)某些微生物對某些物質(zhì)的抗性，在培養(yǎng)基中加入某些物質(zhì)，以抑制不需要的微生物，促進(jìn)所需要的微生物生長，如培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽時可抑制多種細(xì)菌的生長，但不影響金黃色葡萄球菌的生長，從而可將該菌分離出來；而在培養(yǎng)基中加入青霉素時可抑制細(xì)菌、放線菌的生長，從而分離得到酵母菌和霉菌。 （2）通過改變培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分達(dá)到分離微生物的目的：培養(yǎng)基中缺乏氮源時，可分離自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而無法生存；培養(yǎng)基中若缺乏有機(jī)碳源則異養(yǎng)微生物無法生存，而自養(yǎng)微生物可利用空氣中的CO2制造有機(jī)物生存。 （3）利用培養(yǎng)基的特定化學(xué)成分分離特定微生物：如當(dāng)石油是唯一碳源時，可抑制不能利用石油的微生物的生長，使能夠利用石油的微生物生存，從而分離出能消除石油污染的微生物。 （4）通過某些特殊環(huán)境分離微生物：如在高鹽環(huán)境中可分離耐鹽菌，其他菌在鹽濃度高時易失水而不能生存；在高溫環(huán)境中可分離得到耐高溫的微生物，其他微生物在高溫環(huán)境中因酶失活而無法生存。 8．殺蟲脒，又名氯苯脒，是一種有機(jī)氮農(nóng)藥，具有高效廣譜殺蟲殺螨的作用，但長期使用容易導(dǎo)致土壤污染，為探究能降解殺蟲脒的細(xì)菌進(jìn)行了以下實驗。 （1）微生物生長繁殖所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)有碳源、________、水、無機(jī)鹽四類，該實驗所用的培養(yǎng)基只能以殺蟲脒作為唯一氮源，其原因是________________，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于_______培養(yǎng)基。 （2）微生物接種的方法很多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法，這兩種方法在功能上的區(qū)別是_______________，此外，_____________也是測定微生物數(shù)量的常用方法。 （3）為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明該菌株的降解能力_______。 （4）通常情況下，在微生物培養(yǎng)過程中實驗室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和________。培養(yǎng)基一般不使用干熱滅菌的原因是____________________。 【答案】（1）氮源 只有能利用殺蟲脒的微生物才能正常生長和繁殖 選擇 （2）稀釋涂布平板法可以用于統(tǒng)計樣品中活菌數(shù)目 顯微鏡直接計數(shù) （3）強(qiáng) （4）高壓蒸汽滅菌 濕度低會破壞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分 考向五 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù) 9．下列有關(guān)“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)實驗”的敘述，不正確的是 A．用尿素為唯一氮源、加有酚紅指示劑的培養(yǎng)基培養(yǎng)尿素分解菌，指示劑不變紅 B．分解尿素的細(xì)菌能產(chǎn)生脲酶，將尿素分解產(chǎn)生氨和二氧化碳 C．統(tǒng)計尿素分解菌的數(shù)目時，以菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計數(shù) D．將實驗組和對照組平板倒置，30~35 ℃恒溫培養(yǎng)24~48小時 【參考答案】A 【試題解析】用尿素為唯一氮源、加有酚紅指示劑的培養(yǎng)基培養(yǎng)尿素分解菌，尿素分解菌將尿素分解為 易錯警示 稀釋涂布平板法計數(shù)微生物的注意問題 用稀釋涂布平板法計數(shù)微生物時，要求選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)。解題時易出現(xiàn)以下誤解： （1）只得到1個菌落數(shù)在30～300的平板是錯誤的。錯誤的原因是不符合實驗的重復(fù)原則，易受到偶發(fā)因素的影響。 （2）得到3個或3個以上菌落數(shù)在30～300的平板，也不一定正確，這可能有兩種情況： ①不同平板間差異較大，如得到3個平板，菌落數(shù)分別為230、34、240，雖然菌落數(shù)均在“30～300”之間，這也是不正確的，因為“34”與“230”“240”差異太大，應(yīng)重新實驗找出原因。 ②不同平板之間差異不大，是符合要求的，用其平均值作為估算的最終結(jié)果。 可見，并不是只要得到3個“菌落數(shù)在30～300的平板”即可，而應(yīng)該是涂布的同一稀釋度的平板均符合“菌落數(shù)在30～300的平板”且無較大差異，說明實驗操作合格，才能按照計算公式進(jìn)行計算。 10．下表是某同學(xué)列出的分離土壤中微生物培養(yǎng)基的配方，據(jù)此回答下列問題： 培養(yǎng)基配方 KH2PO4 1.4 g Na2HPO4 2.1 g MgSO47H2O 0.2 g 葡萄糖 10.0 g 尿素 1.0 g 瓊脂 15.0 g 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL （1）從作用上看，該培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基，提供氮源的物質(zhì)是________，細(xì)菌能利用該氮源是由于體內(nèi)能合成________酶。 （2）在對分離的能分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行鑒定時，還需在培養(yǎng)基中加入________指示劑，若指示劑變________，說明有目的菌株存在。 （3）為了測定微生物的數(shù)量，接種時應(yīng)采用__________________法，某同學(xué)在4個培養(yǎng)基上分別接種稀釋倍數(shù)為106的土壤樣液0.1 mL，培養(yǎng)后菌落數(shù)分別為180、155、176、129個，則每毫升原土壤樣液中上述微生物的數(shù)量為________，測定的活菌數(shù)比實際活菌數(shù)________(填“低”“高”或“基本一致”)。 【答案】（1）選擇 尿素 脲(催化尿素分解的) （2）酚紅 紅 （3）稀釋涂布平板 1.6109 低 考向六 分解纖維素的微生物的分離 11．分離纖維素分解菌的實驗過程中操作有誤的是 A．經(jīng)選擇培養(yǎng)后即可將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上 B．選擇培養(yǎng)這一步可省略，但纖維素分解菌少 C．經(jīng)稀釋培養(yǎng)后，用剛果紅染色 D．此實驗中需設(shè)置對照組 【參考答案】A 【試題解析】經(jīng)選擇培養(yǎng)后，再經(jīng)稀釋，才能將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上；富集培養(yǎng)可省略；經(jīng)稀釋培養(yǎng)后，用剛果紅染色；設(shè)置對照能證明經(jīng)富集培養(yǎng)得到了欲分離的微生物。 解題技巧 兩種微生物篩選方法的比較 項目 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離 分解纖維素的微生物的分離 方法 使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng) 利用富含纖維素的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng) 原理 土壤中不能分解尿素的微生物因缺乏脲酶而不能正常生長，能夠分解尿素的微生物能利用尿素為氮源正常生長，從而起到選擇作用 因為培養(yǎng)基中含有豐富的纖維素，因此能夠分解纖維素的微生物具有更多的生存機(jī)會而大量繁殖 特有 代表 過程 CO(NH2)2＋H2OCO2＋2NH3 纖維素 纖維二糖葡萄糖 12．植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝邢嚓P(guān)問題： （1）分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分形成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將______________分解成______________。 （2）在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)染料時，CR可與纖維素形成________色復(fù)合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的________。 （3）為從富含纖維素分解菌的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落并加以鑒定，某同學(xué)設(shè)計了甲、乙兩種培養(yǎng)基： 酵母膏 無機(jī)鹽 淀粉 纖維素粉 瓊脂 CR溶液 水 培養(yǎng)基甲 ＋ ＋ － ＋ － ＋ ＋ 培養(yǎng)基乙 ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ 注：“＋”表示“有”，“－”表示“無”。 據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲________(填“能”或“不能”)用于分離纖維素分解菌，原因是__________________________________________；培養(yǎng)基乙________(填“能”或“不能”)用于鑒定纖維素分解菌，原因是__________________________________________。 【答案】（1）纖維二糖 葡萄糖 （2）紅 透明圈 （3）不能 液體培養(yǎng)基不能分離單菌落 不能 培養(yǎng)基中沒有纖維素(不能形成CR－纖維素紅色復(fù)合物) 【解析】（1）葡萄糖苷酶可將纖維二糖分解成葡萄糖。（2）剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。（3）纖維素分解菌分離和鑒別培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，而培養(yǎng)基甲中沒有瓊脂，是液體培養(yǎng)基，要分離和鑒別纖維素分解菌，需要以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基乙沒有纖維素，不能形成CR－纖維素紅色復(fù)合物，無法鑒定纖維素分解菌。 1．下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述，錯誤的是 A．獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染 B．平板劃線法和稀釋涂布平板法都可對微生物進(jìn)行計數(shù) C．培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌法滅菌 D．倒置平板可防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水滴落，造成污染 2．用平板劃線法或稀涂布平板法都可以純化大腸桿菌，二者的共同點是 A．都可以用固體培養(yǎng)基或液體培養(yǎng)基 B．都需要使用接種環(huán)進(jìn)行接種 C．接種時都需要在酒精燈的火焰旁進(jìn)行 D．都可以用來統(tǒng)計樣品中的活菌數(shù) 3．在微生物培養(yǎng)的過程中，需要通過選擇培養(yǎng)或鑒別培養(yǎng)的方法來篩選出目標(biāo)菌種，下列與之相關(guān)的敘述中不正確的是 A．纖維素分解菌能夠分解剛果紅染料，從而使菌落周圍出現(xiàn)透明圈 B．尿素分解菌能夠?qū)⒛蛩胤纸鉃榘?，從而使酚紅指示劑變紅 C．在培養(yǎng)基中加入抗生素能夠篩選出具有相應(yīng)抗性的菌株 D．在含有碳酸鈣的培養(yǎng)基上生長的乳酸菌菌落周圍會出現(xiàn)“溶鈣圈” 4．某研究小組從有機(jī)廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是 A．培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行高壓蒸汽滅菌 B．轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進(jìn)行劃線 C．接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng) D．培養(yǎng)過程中每隔一周觀察三次菌落生長 5．幽門螺桿菌（能分解對熱不穩(wěn)定的尿素）是急慢性胃炎和消化道潰瘍的主要致病因素。為從帶菌者胃粘膜樣本中分離出該細(xì)菌，相關(guān)實驗步驟和方法不合理的是 A．配制培養(yǎng)基并滅菌后，需要加入無菌尿素 B．應(yīng)設(shè)置未接種的培養(yǎng)基，做為實驗的對照 C．統(tǒng)計樣本中活菌數(shù)量時，可用劃線法接種 D．可利用酚紅指示劑對培養(yǎng)的菌落進(jìn)行鑒定 6．如圖為分離和純化分解甲醛細(xì)菌的實驗過程，其中LB培養(yǎng)基能使菌種成倍擴(kuò)增，以下說法正確的是 A．需要對活性污泥作滅菌處理 B．②中LB培養(yǎng)基應(yīng)以甲醛為唯一碳源 C．目的菌種異化作用類型為厭氧型 D．經(jīng)⑤處理后，應(yīng)選擇瓶中甲醛濃度最低的一組進(jìn)一步純化培養(yǎng) 7．如圖所示，自來水經(jīng)濾膜過濾后，轉(zhuǎn)移到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上，適宜條件下培養(yǎng)48 h，染色后統(tǒng)計變色菌落數(shù)目為165個。下列說法正確的是 A．若培養(yǎng)基含伊紅—美藍(lán)，大腸桿菌菌落呈藍(lán)綠色 B．自來水中大腸桿菌濃度是33個L-1，比真實值偏大 C．為了提高準(zhǔn)確度，需設(shè)重復(fù)實驗，但不用空白對照 D．若培養(yǎng)基菌落數(shù)目大于300，可適當(dāng)減少自來水量 8．下圖是研究人員從紅棕壤中篩選高效分解尿素細(xì)菌的示意圖，有關(guān)敘述錯誤的是 A．在配制步驟②、③的培養(yǎng)基時，應(yīng)先調(diào)pH值后高壓蒸汽滅菌 B．步驟③采用涂布平板法接種，并需向牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入尿素 C．步驟④挑?、壑胁煌N的菌落分別接種，比較細(xì)菌分解尿素的能力 D．步驟③純化分解尿素的原理是將聚集的細(xì)菌分散，可以獲得單細(xì)胞菌落 9．分離篩選降解纖維素能力強(qiáng)的微生物，對于解決秸稈等廢棄物資源的再利用和環(huán)境污染問題具有重要意義。研究人員用化合物A、硝酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、KCl、酵母膏以及水解酪素配制的培養(yǎng)基，成功地篩選到能產(chǎn)生纖維素酶的微生物。請回答下列問題： （1）培養(yǎng)基中加入的化合物A是_____。本實驗將樣品稀釋涂布到鑒別培養(yǎng)基之前要進(jìn)行選擇培養(yǎng)，目的是_________。 （2）為了篩選出能產(chǎn)生纖維素酶的微生物，向培養(yǎng)基中加入______溶液，等培養(yǎng)基上長出菌落后，能產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍會出現(xiàn)_____。 （3）為在培養(yǎng)基表面形成單個菌落，若以接種環(huán)為工具，則用______進(jìn)行接種。若用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種，在涂布平板時，滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過多的原因是_________________。 （4）用三種菌株對秸稈進(jìn)行處理，并在第5天和第10天對秸稈和秸稈中含有的纖維素、半纖維素以及木質(zhì)素等組分的降解情況進(jìn)行了測定（結(jié)果如圖）。 據(jù)圖分析可知，三種菌株對_____的降解作用最強(qiáng)。與第5天結(jié)果相比，第10天秸稈各組分中_____的降解率變化最大。 10．聚對苯二甲酸乙二酯(PET)是塑料類水瓶的重要原料，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)了以PET為碳源和能量來源的細(xì)菌，該發(fā)現(xiàn)對PET類材料的回收利用、環(huán)境治理意義重大。請回答下列問題： （1）實驗小組欲從土壤中獲取PET降解菌，需將土壤樣品置于________為唯一碳源的培養(yǎng)基中進(jìn)行選擇培養(yǎng)，其目的是______________。 （2）該實驗小組選取PET濃度為800 mgL-1的富集液進(jìn)行系列稀釋，分別取10-3、10-4和10-5倍數(shù)的稀釋液0.1 mL涂布于培養(yǎng)基上，每個稀釋倍數(shù)涂布三個平板，各平板的菌落數(shù)分別為（286、298、297)，(35、32、31)，(36、7、2)，不適合用于計數(shù)的為________倍數(shù)的稀釋液，用另外兩組稀釋倍數(shù)的稀釋液進(jìn)行計數(shù)得到的細(xì)菌數(shù)不一致的原因可能是__________________________。 （3）倒平板時應(yīng)使錐形瓶的瓶口通過火焰，目的是________。在倒平板的過程中，如果培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，則這個平板不能用來培養(yǎng)大腸桿菌，原因是____________。用平板劃線法純化PET降解菌的過程中，在第二次及其后的劃線操作時，須從上一次劃線的末端開始劃線，原因是__________。 （4）在保藏PET降解菌菌種時，可采取____________的方法進(jìn)行長期保存。 11．（2018全國Ⅰ卷）將馬鈴薯去皮切塊，加水煮沸一定時間，過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖和瓊脂，用水定容后滅菌，得到M培養(yǎng)基。 回答下列問題： （1）M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選，則培養(yǎng)基中應(yīng)加入鏈霉素以抑制_______的生長，加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于____________培養(yǎng)基。 （2）M培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長提供了多種營養(yǎng)物質(zhì)，營養(yǎng)物質(zhì)類型除氮源外還有__________ （答出兩點即可）。氮源進(jìn)入細(xì)胞后，可參與合成的生物大分子有______（答出兩點即可）。 （3）若在M培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖，接種土壤濾液并培養(yǎng)，平板上長出菌落后可通過加入顯色劑篩選出能產(chǎn)淀粉酶的微生物。加入的顯色劑是____________，該方法能篩選出產(chǎn)淀粉酶微生物的原理是_____________。 （4）甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量，在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果： 甲同學(xué)涂布了3個平板，統(tǒng)計的偏落數(shù)分別是110、140和149，取平均值133； 乙同學(xué)涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是27、169和176，取平均值124。 有人認(rèn)為這兩位同學(xué)的結(jié)果中，乙同學(xué)的結(jié)果可信度低，其原因是____________。 12．（2018全國Ⅱ卷）在生產(chǎn)、生活和科研實踐中，經(jīng)常通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染?；卮鹣铝袉栴}： （1）在實驗室中，玻璃和金屬材質(zhì)的實驗器具_(dá)_______（填“可以”或“不可以”）放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌。 （2）牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法，與煮沸消毒法相比，這兩種方法的優(yōu)點是_____________________。 （3）密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒，其原因是紫外線能________，在照射前，適量噴灑_________，可強(qiáng)化消毒效果。 （4）水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過________（填“氯氣”“乙醇”或“高錳酸鉀”）消毒的。 （5）某同學(xué)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時，若壓力達(dá)到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達(dá)到相應(yīng)溫度，最可能的原因是__________________________。 13．（2018江蘇卷）酵母的蛋白質(zhì)含量可達(dá)自身干重的一半，可作為飼料蛋白的來源。有些酵母可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培養(yǎng)，這樣既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類酵母，并進(jìn)行大量培養(yǎng)。下圖所示為操作流程，請回答下列問題： （1）配制培養(yǎng)基時，按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱量各組分，將其溶解、定容后，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的＿＿＿＿＿，及時對培養(yǎng)基進(jìn)行分裝，并進(jìn)行＿＿＿滅菌。 （2）取步驟②中不同梯度的稀釋液加入標(biāo)記好的無菌培養(yǎng)皿中，在步驟③中將溫度約＿＿＿（在25 ℃、50 ℃或80 ℃中選擇）的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻，冷凝后倒置培養(yǎng)。 （3）挑取分離平板中長出的單菌落，按步驟④所示進(jìn)行劃線。下列敘述合理的有＿＿＿＿＿＿。 a．為保證無菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌 b．劃線時應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，以免不能形成正常菌落 c．挑取菌落時，應(yīng)挑取多個菌落，分別測定酵母細(xì)胞中甲醇的含量 d．可以通過逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受株 （4）步驟⑤中，為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過程中需保證充足的營養(yǎng)和＿＿＿＿＿＿供應(yīng)。為監(jiān)測酵母的活細(xì)胞密度，將發(fā)酵液稀釋1 000倍后，經(jīng)等體積臺盼藍(lán)染液染色，用2516型血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)5個中格中的細(xì)胞數(shù)，理論上＿＿＿色細(xì)胞的個數(shù)應(yīng)不少于＿＿＿＿＿＿，才能達(dá)到每毫升3109個活細(xì)胞的預(yù)期密度。 1．【答案】B 【解析】微生物培養(yǎng)中，獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染，A正確；利用稀釋涂布平板法接種微生物可以形成單菌落，常用來進(jìn)行微生物的計數(shù)，但利用平板劃線法接種微生物不易分離出單菌落，不能對微生物進(jìn)行計數(shù)，常用來篩選分離微生物，B錯誤；常用高壓蒸汽滅菌法對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，C正確；倒平板后，需要將培養(yǎng)皿倒置，以防止培養(yǎng)基蒸發(fā)冷凝成的水滴入培養(yǎng)基而造成污染，D正確。 2．【答案】C 【解析】平板劃線法和稀釋涂布平板法都是在固體培養(yǎng)基上進(jìn)行的，A錯誤；平板劃線法接種用接種針，稀釋涂布平板法接種要用涂布器，B錯誤；不論是平板劃線法還是稀釋涂布平板法，都需要進(jìn)行無菌操作，在酒精燈火焰旁進(jìn)行，C正確；平板劃線法不能用于計數(shù)活菌，只能用于分離菌種，稀釋涂布平板法可以用來計數(shù)活菌，D錯誤。 3．【答案】A 4．【答案】B 【解析】在配制培養(yǎng)基的過程中要先滅菌后倒平板，A錯誤；灼燒接種環(huán)可以防止殘留菌種對實驗的干擾，因此轉(zhuǎn)換劃線角度后要對接種環(huán)進(jìn)行灼燒滅菌再進(jìn)行劃線，B正確；接種后放置在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，C錯誤；微生物的繁殖速度快，培養(yǎng)過程中一般要隔天觀察一次，D錯誤。 5．【答案】C 【解析】幽門螺桿菌能分解尿素，因此在分離培養(yǎng)基中加入尿素作為唯一氮源，將幽門螺桿菌跟其他微生物分離，由于尿素對熱不穩(wěn)定，需對培養(yǎng)基滅菌后再加入無菌尿素，A正確；依據(jù)實驗的對照原則，應(yīng)設(shè)置未接種的培養(yǎng)基，做為實驗的對照，B正確；劃線法不能用于統(tǒng)計活菌的數(shù)目，C錯誤；幽門螺桿菌菌落將尿素分解為氨，使培養(yǎng)基顯堿性，可利用酚紅指示劑進(jìn)行鑒定，D正確。 6．【答案】D 【解析】該實驗是從活性污泥中分離和純化分解甲醛細(xì)菌，則活性污泥不能滅菌，A錯誤；LB培養(yǎng)基使菌種成倍擴(kuò)增，應(yīng)用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，B錯誤；圖示分解甲醛細(xì)菌是在培養(yǎng)皿中進(jìn)行的，屬于需氧型細(xì)菌，C錯誤；經(jīng)⑤處理后，瓶中甲醛濃度降低，甲醛濃度最低的一組中分解甲醛細(xì)菌純度最高，可進(jìn)一步純化培養(yǎng)，D正確。 7．【答案】D 【解析】若培養(yǎng)基含伊紅—美藍(lán)，大腸桿菌菌落呈黑色或紫黑色，有金屬光澤，A錯誤；自來水中大腸桿菌濃度是1655=33個/L，由于兩個或多個大腸桿菌可能長成一個菌落，因此比真實值偏小，B錯誤；為了提高準(zhǔn)確度，需設(shè)重復(fù)實驗，同時需要設(shè)置空白對照，C錯誤；若培養(yǎng)基菌落數(shù)目大于300，說明細(xì)菌數(shù)目較多，可適當(dāng)減少自來水量，D正確。 8．【答案】B 9．【答案】（1）纖維素 增加纖維素分解菌的濃度 （2）剛果紅 透明圈 （3）平板劃線法 培養(yǎng)基表面的菌液會出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，影響分離效果 （4）半纖維素 纖維素 【解析】（1）為篩選能夠降解纖維素的微生物，培養(yǎng)中應(yīng)添加以纖維素作為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基中加入的化合物A是纖維素，選擇培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的濃度。（2）纖維素分解菌的鑒定需用剛果紅，等培養(yǎng)基上長出菌落后，能產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍會出現(xiàn)透明圈。（3）平板劃線法以接種環(huán)為接種工具，用接種環(huán)取菌后需要在平板上劃線進(jìn)行接種。稀釋涂布平板法接種前需將待分離的菌液進(jìn)行稀釋，涂布時，滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過多，防止培養(yǎng)基表面的菌液出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，影響分離效果。（4）據(jù)圖可知，三種菌株對半纖維素的降解率最高，與第5天結(jié)果相比，第10天秸稈各組分中半纖維素和木質(zhì)素降解率變化不大，纖維素的降解率變化較大。 10．【答案】（1）PET 增加PET降解菌的濃度，以確保能分離得到目的菌 （2）10-5 稀釋倍數(shù)為10-3時，更多的菌落連在一起，最終形成單菌落，導(dǎo)致結(jié)果小于稀釋倍數(shù)為10-4組的結(jié)果 （3）滅菌，防止微生物污染 空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生 使細(xì)菌數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個細(xì)菌繁殖而成的菌落 （4）甘油管藏 【解析】（1）欲從土壤中獲取PET降解菌，需將土壤樣品置于以PET為唯一碳源的培養(yǎng)基中進(jìn)行選擇培養(yǎng)，其目的是增加PET降解菌的濃度，以確保能分離得到目的菌。（2）為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)，據(jù)此結(jié)合題意可知：不適合用于計數(shù)的為10-5倍數(shù)的稀釋液。用另外兩組稀釋倍數(shù)的稀釋液進(jìn)行計數(shù)，得到的細(xì)菌數(shù)不一致的原因可能是稀釋倍數(shù)為10-3時，更多的菌落連在一起，最終形成單菌落，導(dǎo)致結(jié)果小于稀釋倍數(shù)為10-4組的結(jié)果。（3）倒平板時應(yīng)使錐形瓶的瓶口通過火焰，其目的是滅菌，防止微生物污染。在倒平板的過程中，如果培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此這個平板不能用來培養(yǎng)大腸桿菌。用平板劃線法純化PET降解菌的過程中，為使細(xì)菌數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個細(xì)菌繁殖而成的菌落，在第二次及其后的劃線操作時，須從上一次劃線的末端開始劃線。（4）對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。 11．【答案】（1）細(xì)菌 選擇 （2）碳源、無機(jī)鹽 蛋白質(zhì)、核酸 （3）碘液 淀粉遇碘液顯藍(lán)色，產(chǎn)淀粉酶的菌落周圍淀粉被水解，形成透明圈 （4）乙同學(xué)的結(jié)果中，1個平板的計數(shù)結(jié)果與另2個相差懸殊，結(jié)果的重復(fù)性差 12．【答案】（1）可以 （2）在達(dá)到消毒目的的同時，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少 （3）破壞DNA結(jié)構(gòu) 消毒液 （4）氯氣 （5）未將鍋內(nèi)冷空氣排盡 【解析】（1）能耐高溫的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等可以放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌。 （2）煮沸消毒法即在100℃時煮沸5－6min可以殺死微生物細(xì)胞和一部分芽孢；巴氏消毒法即在70－75℃時煮30min或在80℃時煮15min，可以殺死微生物，并且保證營養(yǎng)物質(zhì)不被破壞。因此，與煮沸消毒法相比，牛奶消毒常采用的巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法的優(yōu)點是達(dá)到消毒目的的同時，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少。（3）因紫外線能破壞DNA結(jié)構(gòu)，所以密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒。在照射前，適量噴灑消毒液，可強(qiáng)化消毒效果。（4）通常乙醇消毒是75%的酒精，有氣味，影響水質(zhì)，不適宜消毒自來水；高錳酸鉀本身有顏色，消毒后溶液呈紫紅色，無法使用；因此水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過氯氣消毒的。（5）采用高壓蒸汽滅菌時，鍋內(nèi)的水加熱煮沸，將其中原有的冷空氣徹底排除后才能將鍋密閉。如果未將鍋內(nèi)冷空氣排盡，則會出現(xiàn)壓力達(dá)到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達(dá)到相應(yīng)溫度的現(xiàn)象。 13．【答案】（1）pH 高壓蒸汽（濕熱） （2）50 ℃ （3）a、b、d （4）氧氣 無 30