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[思維導(dǎo)圖成一統(tǒng)] [基礎(chǔ)速練固根基] 1．判斷下列敘述的正誤 (1)培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽(√) (2)在配制培養(yǎng)基時(shí)，除滿足營(yíng)養(yǎng)需求外，還應(yīng)考慮pH、O2及微生物對(duì)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求(√) (3)培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后才能進(jìn)行滅菌 () (4)消毒的原則是既能殺死材料表面的微生物，又要減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害(√) (5)無(wú)菌操作的對(duì)象只要是沒(méi)有生物活性的材料(如培養(yǎng)基、接種環(huán)等)都可采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌() (6)平板劃線法中每一次劃線后要將接種環(huán)灼燒(√) (7)用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)，只要稀釋度足夠高，就可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落(√) 2．據(jù)倒平板的操作圖示填空 (1)請(qǐng)用文字和箭頭寫出正確的倒平板操作流程： 丙→乙→甲→丁。 (2)甲、乙、丙中的滅菌方法是灼燒滅菌。 (3)丁中的操作需要等待平板冷卻凝固后才能進(jìn)行。 3．據(jù)微生物接種后培養(yǎng)的效果圖回答問(wèn)題 (1)獲得圖A效果和圖B效果的接種方法分別是什么？ 提示：獲得效果A的接種方法為稀釋涂布平板法，獲得效果B的接種方法為平板劃線法。 (2)某同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成一片，最可能的原因是什么？應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象？ 提示：最可能的原因是菌液濃度過(guò)高或劃線時(shí)在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)滅菌。采取的措施是增大稀釋倍數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)滅菌。 [題組練透過(guò)考點(diǎn)] 題組一　培養(yǎng)基的成分、功能及其制備 1．下列關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．培養(yǎng)基應(yīng)先調(diào)pH再進(jìn)行滅菌 B．培養(yǎng)基應(yīng)先滅菌再分裝到培養(yǎng)皿 C．溶化瓊脂時(shí)不能使培養(yǎng)基溢出或燒焦 D．高壓蒸汽滅菌鍋加蓋時(shí)應(yīng)按順時(shí)針?lè)较蛞来涡o螺栓 解析：選D　制備培養(yǎng)基滅菌時(shí)，培養(yǎng)基應(yīng)該先調(diào)節(jié)pH后滅菌。培養(yǎng)基在分裝到培養(yǎng)皿之前要先進(jìn)行滅菌處理，以防止雜菌的污染。溶化瓊脂時(shí)要用玻璃棒攪拌，防止瓊脂燒焦，攪拌的過(guò)程不能讓瓊脂溢出。高壓蒸汽滅菌鍋加蓋時(shí)要以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，而不是依次旋緊。 2．(2017全國(guó)卷Ⅰ)某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用?；卮鹣铝袉?wèn)題： (1)有些細(xì)菌能分解尿素，有些細(xì)菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生__________。能分解尿素的細(xì)菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源，原因是__________________________________________。但可用葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是______________________________________________(答出兩點(diǎn)即可)。 (2)為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇________(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作為氮源，不選擇其他兩組的原因是____________________________________________________。 (3)用來(lái)篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有________________________________________________(答出兩點(diǎn)即可)。 解析：(1)土壤中的某些細(xì)菌之所以能夠分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡墚a(chǎn)生脲酶。尿素分解菌是異養(yǎng)生物，不能利用CO2來(lái)合成有機(jī)物，必須利用現(xiàn)成的有機(jī)物(如葡萄糖)作為碳源；葡萄糖通過(guò)呼吸作用被分解時(shí)，能為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量，同時(shí)，葡萄糖還可以轉(zhuǎn)化成脂肪、某些氨基酸等物質(zhì)，所以進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖能為其他有機(jī)物的合成提供原料。(2)選擇培養(yǎng)基是只允許特定種類的微生物(目的微生物)生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。本實(shí)驗(yàn)的目的菌是可分解尿素的細(xì)菌，因此配制的培養(yǎng)基應(yīng)只允許尿素分解菌生長(zhǎng)，NH4NO3可以作為所有細(xì)菌的氮源，培養(yǎng)基中如含有NH4NO3，將不能起到篩選作用。(3)KH2PO4和Na2HPO4能為細(xì)菌生長(zhǎng)提供鉀鹽、鈉鹽和磷酸鹽，而H2PO/HPO可作為緩沖劑，使培養(yǎng)基中pH保持相對(duì)穩(wěn)定。 答案：(1)脲酶　分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，不能利用CO2來(lái)合成有機(jī)物　為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量，為其他有機(jī)物的合成提供原料　(2)尿素　其他兩組都含有NH4NO3，能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3，不能起到篩選作用　(3)為細(xì)菌生長(zhǎng)提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH穩(wěn)定 [歸納拓展]　培養(yǎng)基的配制、成分確定及種類 (1)培養(yǎng)基的配制原則： ①目的要明確：配制時(shí)應(yīng)根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類。 ②營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。 ③pH要適宜：細(xì)菌為6.5～7.5，放線菌為7.5～8.5，真菌為5.0～6.0，培養(yǎng)不同微生物所需的pH不同。 (2)培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的確定方法： 不同種類的微生物代謝特點(diǎn)不同，因此對(duì)培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求也不同。如： ①自養(yǎng)型微生物所需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是無(wú)機(jī)鹽，碳源可來(lái)自大氣中的CO2，氮源可由含氮無(wú)機(jī)鹽提供。 ②異養(yǎng)型微生物所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要是有機(jī)物(即碳源)，必須由含碳有機(jī)物提供，氮源也主要由有機(jī)物提供，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無(wú)機(jī)氮源。 (3)培養(yǎng)基的分類： ①按物理狀態(tài)分類： 培養(yǎng)基種類 特點(diǎn) 用途 液體培養(yǎng)基 不加凝固劑 工業(yè)生產(chǎn) 半固體 培養(yǎng)基 加凝固劑(如瓊脂) 觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類 鑒定　　　　　　　　 固體培養(yǎng)基 加凝固劑(如瓊脂) 微生物分離、鑒定，活菌計(jì)數(shù)，菌種保藏 ②按功能分類： 種類 制備方法 原理 用途 舉例 選擇培 養(yǎng)基 培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì) 依據(jù)某些微生物對(duì)某些物質(zhì)的特殊需求或抗性而設(shè)計(jì) 從眾多微生物中分離所需的微生物 加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌 鑒別培 養(yǎng)基 培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品 產(chǎn)生特定的顏色或其他變化 鑒別不同種類的微生物 用伊紅—美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌 (4)培養(yǎng)基制備中倒平板的注意事項(xiàng)： ①培養(yǎng)基需冷卻至50 ℃時(shí)開(kāi)始倒平板，原因是：瓊脂是一種多糖，在98 ℃以上溶化，在44 ℃以下凝固，倒平板時(shí)高于50 ℃則會(huì)燙手，低于50 ℃時(shí)若不能及時(shí)操作，瓊脂會(huì)凝固。 ②需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰，通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。 ③平板冷凝后，要將平板倒置。因?yàn)槠桨謇淠?，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，培養(yǎng)基表面的溫度也較高，平板倒置后，既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 ④在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板不能用來(lái)培養(yǎng)微生物。因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。 題組二　無(wú)菌技術(shù)的操作 3．下列操作必需在嚴(yán)格無(wú)菌條件下進(jìn)行的是(　　) A．稱量牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的各種成分 B．利用平板劃線法接種大腸桿菌 C．用酒精擦拭雙手 D．溶化牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的各種成分 解析：選B　稱量牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的各種成分要求清潔和消毒；利用平板劃線法接種大腸桿菌必需在嚴(yán)格無(wú)菌條件下進(jìn)行，否則混入雜菌，不能提取到目的菌；用酒精擦拭雙手為清潔和消毒；配制好的培養(yǎng)基還要進(jìn)行滅菌，故溶化牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的各種成分無(wú)需滅菌。 4．(2014江蘇高考節(jié)選)為了獲得β胡蘿卜素產(chǎn)品，某小組開(kāi)展了產(chǎn)β胡蘿卜素酵母的篩選與色素提取實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題： (1)實(shí)驗(yàn)用的培養(yǎng)皿常用的兩種滅菌方法是______________________________________ ____________________；為了減少滅菌后器皿被污染，滅菌前應(yīng)該_________________。 (2)為了篩選出酵母菌，培養(yǎng)基中添加了青霉素，其目的是______________。 (3)右圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖，圖中甲、乙、丙指示的依次是________(填序號(hào))。 ①安全閥、放氣閥、壓力表　　?、诜艢忾y、安全閥、壓力表 ③安全閥、放氣閥、溫度表　　　④放氣閥、安全閥、溫度表 (4)為了將分離到的菌株純化，挑取了菌落在3塊相同平板上劃線，結(jié)果其中一塊平板的各劃線區(qū)均未見(jiàn)菌生長(zhǎng)，最可能的原因是____________________________________。 解析：(1)實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法是干熱滅菌和濕熱滅菌(高壓蒸汽滅菌)，在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)用牛皮紙或干凈的報(bào)紙包扎器皿。(2)酵母菌是真菌，對(duì)青霉素具有抵抗能力，青霉素主要抑制細(xì)菌、放線菌的生長(zhǎng)。(3)圖中甲為安全閥，乙為放氣閥，丙為壓力表。(4)該接種過(guò)程中的3塊平板相同，菌種來(lái)源相同，只有一塊平板接種培養(yǎng)后無(wú)菌落，對(duì)比知，問(wèn)題出現(xiàn)在接種過(guò)程中，最可能的原因是接種環(huán)灼燒后未充分冷卻，菌種被殺死。 答案：(1)干熱滅菌和濕熱滅菌(高壓蒸汽滅菌)　用牛皮紙(報(bào)紙)包扎器皿　(2)抑制細(xì)菌(放線菌)的生長(zhǎng) (3)①　(4)接種環(huán)溫度過(guò)高，菌種被殺死 [歸納拓展] 1．消毒和滅菌的比較 項(xiàng)目 消毒 滅菌 條件 較為溫和的物理或化學(xué)方法 強(qiáng)烈的理化因素 結(jié)果 僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子) 殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子 常用 方法 煮沸 消毒法 巴氏 消毒法 化學(xué)藥劑 消毒法 灼燒 滅菌法 干熱 滅菌法 高壓蒸汽 滅菌法 操作 方法 100 ℃ 煮沸 5～6 min 80 ℃煮 15 min 或在 70～75 ℃ 煮30 min 70%酒 精、氯氣 等　　 酒精燈 火焰的 外焰　 干熱滅菌 箱，160～ 170 ℃，維 持1～2 h 高壓蒸汽 滅菌鍋，恒 溫121 ℃， 維持15～ 30 min　 應(yīng)用 范圍 日常 用品 不耐高 溫的液 體　　 用酒精擦 拭雙手， 用氯氣消 毒水源　 接種 工具 玻璃器皿、金屬工具 培養(yǎng)基 及容器 的滅菌 2.高壓蒸汽滅菌鍋的使用注意事項(xiàng) (1)首先向滅菌鍋內(nèi)加入適量的水。 (2)裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免妨礙蒸汽流通而影響滅菌效果。錐形瓶與試管口不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包裹瓶口的紙而透入棉塞。 (3)擰緊固定蓋子的螺栓，注意要同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，不漏氣。 (4)加熱滅菌鍋，打開(kāi)排氣閥，使水沸騰，排除鍋內(nèi)的冷空氣。等冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐步上升。 (5)到滅菌時(shí)間后，切斷熱源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降到零時(shí)，打開(kāi)排氣閥，旋松螺栓，打開(kāi)蓋子，取出滅菌物品。 題組三　微生物的培養(yǎng)與純化 5．(2017江蘇高考)苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對(duì)環(huán)境有嚴(yán)重危害。小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)如圖操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請(qǐng)回答下列問(wèn)題： (1)酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作為碳源的有____________。 (2)將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸________，以達(dá)到富集酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過(guò)于密集，應(yīng)進(jìn)一步____________，以便于菌落計(jì)數(shù)與分離。制備平板培養(yǎng)基時(shí)除了需要水、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還必須添加________。 (3)右圖為連續(xù)劃線法示意圖，在圖中____________(填圖中序號(hào))區(qū)域更易獲得單菌落。 (4)采用比色測(cè)定法(使用苯酚顯色劑)檢測(cè)降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進(jìn)行顯色反應(yīng)，下表中1～5號(hào)比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為_(kāi)__________________________________________________________ ________________________。 管號(hào) 1 2 3 4 5 6 苯酚濃度(mg/L) 1 如果廢水為50 mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，則需將殘留液稀釋____________(填序號(hào)：①5?、?0?、?0)倍后，再進(jìn)行比色。 解析：(1)富集培養(yǎng)基中蛋白胨、苯酚都是含碳的有機(jī)物，可作為碳源。(2)欲富集酚降解菌，隨轉(zhuǎn)接次數(shù)的增加，應(yīng)逐漸增加培養(yǎng)基中苯酚的含量；若接種培養(yǎng)后平板上菌落過(guò)于密集，則應(yīng)進(jìn)一步稀釋后再進(jìn)行涂布，以降低平板上菌落密度，便于菌落計(jì)數(shù)與分離；平板培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基，除含有水、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽等)外，還需添加瓊脂作為凝固劑。(3)利用連續(xù)劃線法接種時(shí)，最后的劃線區(qū)域(③)中，菌體的密度較小，容易獲得單菌落。(4)因系列濃度梯度中6號(hào)比色管中苯酚濃度為1 mg/L，故1～5號(hào)比色管中的苯酚濃度應(yīng)分別為0 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L、0.6 mg/L、0.8 mg/L；根據(jù)題意，廢水為50 mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，要使稀釋后的苯酚殘留液濃度介于0～1 mg/L，需將殘留液稀釋20倍左右。 答案：(1)蛋白胨、苯酚　(2)增加　稀釋涂布　凝固劑(瓊脂)　(3)③　(4)0、0.2、0.4、0.6、0.8?、? [歸納拓展]　純化微生物的接種方法 (1)平板劃線法和稀釋涂布平板法的比較： 項(xiàng)目 平板劃線法 稀釋涂布平板法 關(guān)鍵操作 接種環(huán)在固體平板培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線 ①一系列的梯度稀釋 ②涂布平板法操作 注意 事項(xiàng) 每次劃線前后均需灼燒接種環(huán) 稀釋度要足夠高，為確保實(shí)驗(yàn)成功可以增加稀釋度的范圍 菌體 獲取 在具有顯著的菌落特征的區(qū)域菌落中挑取菌體 從適宜的稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體 適用 范圍 適用于好氧菌 適用于厭氧菌和兼性厭氧菌 優(yōu)點(diǎn) 可以根據(jù)菌落的特點(diǎn)獲得某種微生物的單細(xì)胞菌落 既可以獲得單細(xì)胞菌落，又能對(duì)微生物計(jì)數(shù) 缺點(diǎn) 不能對(duì)微生物計(jì)數(shù) 操作復(fù)雜，需要涂布多個(gè)平板 (2)平板劃線操作的注意事項(xiàng)： ①灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。 ②第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開(kāi)始，能使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。 ③劃線時(shí)最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。 ④劃線用力大小要適當(dāng)，防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破。 ⑤操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要進(jìn)行火焰灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束時(shí)，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的如下表： 第一次操作 每次劃線之前 劃線結(jié)束 目的 殺死接種環(huán)上原有的微生物 殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少 殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免微生物污染環(huán)境和感染操作者 題組四　微生物的數(shù)量測(cè)定與應(yīng)用 6．(2018江蘇高考)酵母的蛋白質(zhì)含量可達(dá)自身干重的一半，可作為飼料蛋白的來(lái)源。有些酵母可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培養(yǎng)，這樣既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類酵母，并進(jìn)行大量培養(yǎng)。下圖所示為操作流程，請(qǐng)回答下列問(wèn)題： (1)配制培養(yǎng)基時(shí)，按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱量各組分，將其溶解、定容后，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的________，及時(shí)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行分裝，并進(jìn)行____________滅菌。 (2)取步驟②中不同梯度的稀釋液加入標(biāo)記好的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，在步驟③中將溫度約____________(在25 ℃、50 ℃或80 ℃中選擇)的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻，冷凝后倒置培養(yǎng)。 (3)挑取分離平板中長(zhǎng)出的單菌落，按步驟④所示進(jìn)行劃線。下列敘述合理的有________。 a．為保證無(wú)菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌 b．劃線時(shí)應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，以免不能形成正常菌落 c．挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取多個(gè)菌落，分別測(cè)定酵母細(xì)胞中甲醇的含量 d．可以通過(guò)逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受株 (4)步驟⑤中，為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過(guò)程中需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和________供應(yīng)。為監(jiān)測(cè)酵母的活細(xì)胞密度，將發(fā)酵液稀釋1 000倍后，經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色，用2516型血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)5個(gè)中格中的細(xì)胞數(shù)，理論上________色細(xì)胞的個(gè)數(shù)應(yīng)不少于________，才能達(dá)到每毫升3109個(gè)活細(xì)胞的預(yù)期密度。 解析：(1)配制培養(yǎng)基時(shí)，進(jìn)行計(jì)算、稱量、溶解、定容后，需先調(diào)pH再分裝到錐形瓶中進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。(2)倒平板時(shí)的培養(yǎng)基溫度約為50 ℃，冷凝后倒置培養(yǎng)。(3)平板劃線時(shí)，接種針、接種環(huán)使用前和每次劃線后都需要進(jìn)行灼燒滅菌，以免造成雜菌污染；劃線時(shí)不能劃破培養(yǎng)基表面，否則不能形成正常菌落；挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取多個(gè)不同的菌落，分別測(cè)定酵母細(xì)胞中蛋白質(zhì)含量；逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，能篩選出其中的耐受菌，獲得耐受高甲醇的菌株。(4)酵母菌是兼性厭氧型真菌，在有氧條件下可大量繁殖。酵母擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣等條件。由題中信息“經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色”可知，計(jì)數(shù)室中培養(yǎng)液容積實(shí)際只有0.12＝0.05 (mm3)。設(shè)5個(gè)中方格中無(wú)色(活細(xì)胞不能被臺(tái)盼藍(lán)染色)的細(xì)胞數(shù)目為x個(gè)，則3109＝x/5251 0001 0000.05，解得x＝30(個(gè))。 答案：(1)pH　高壓蒸汽(濕熱)　(2)50 ℃　(3)a、b、d (4)氧氣　無(wú)　30 [歸納拓展]　微生物的直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法 (1)直接計(jì)數(shù)法：常用的是顯微鏡直接計(jì)數(shù)法，該方法所需設(shè)備簡(jiǎn)單，可迅速得到結(jié)果，而且在計(jì)數(shù)的同時(shí)能觀察所研究微生物的形態(tài)特征。但若要區(qū)分菌體的死活，則需染色后再觀察，如死細(xì)胞可被亞甲基藍(lán)染成藍(lán)色。 (2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)：常用稀釋涂布平板法。 ①理論依據(jù)是：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落即代表一個(gè)活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，每個(gè)稀釋倍數(shù)涂布3個(gè)平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，取平均值。 ②計(jì)算公式：每克樣品中的菌落數(shù)＝C/VM，其中C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。 [課堂鞏固練—小試身手] 1．(2015江蘇高考)做“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)時(shí)，下列敘述正確的是(　　) A．高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開(kāi)放氣閥使壓力表指針回到零后，開(kāi)啟鍋蓋 B．倒平板時(shí)，應(yīng)將打開(kāi)的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上 C．為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落 D．用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上 解析：選D　在高壓滅菌的操作過(guò)程中，加熱結(jié)束后應(yīng)讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，待壓力表的壓力降到零時(shí)，打開(kāi)放氣閥，旋松螺栓，打開(kāi)蓋子。倒平板時(shí)，用左手將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，而不是完全取下放到一邊。接種環(huán)經(jīng)火焰灼燒滅菌后應(yīng)在火焰旁冷卻后，再用其挑取菌落。在微生物的培養(yǎng)中，一般將培養(yǎng)皿倒置，在皿底上用記號(hào)筆做標(biāo)記。 2．(2016江蘇高考，多選)漆酶屬于木質(zhì)素降解酶類，在環(huán)境修復(fù)、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域有著廣泛用途。下圖是分離、純化和保存漆酶菌株的過(guò)程，相關(guān)敘述正確的是(　　) A．生活污水中含有大量微生物，是分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品 B．篩選培養(yǎng)基中需要加入漆酶的底物，通過(guò)菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落 C．在涂布平板上長(zhǎng)出的菌落，再通過(guò)劃線進(jìn)一步純化 D．斜面培養(yǎng)基中含有大量營(yíng)養(yǎng)物，可在常溫下長(zhǎng)期保存菌株 解析：選BC　生活污水中含木質(zhì)素的物質(zhì)相對(duì)較少，產(chǎn)漆酶菌株也較少，不宜作為分離產(chǎn)漆酶菌株的樣品；產(chǎn)漆酶菌株可降解木質(zhì)素，在篩選培養(yǎng)基中加入木質(zhì)素可篩選產(chǎn)漆酶的菌株，篩選時(shí)可通過(guò)菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落；在涂布平板上生長(zhǎng)的菌落可能還有其他雜菌，可再通過(guò)平板劃線法進(jìn)一步純化；對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法，即在－20 ℃的冷凍箱中保存。 3．(2015江蘇高考)人工瘤胃模仿了牛羊等反芻動(dòng)物的胃，可用來(lái)發(fā)酵處理秸稈，提高秸稈的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。為了增強(qiáng)發(fā)酵效果，研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產(chǎn)菌株，并對(duì)其降解纖維素能力進(jìn)行了研究。請(qǐng)回答下列問(wèn)題： (1)在樣品稀釋和涂布平板步驟中，下列選項(xiàng)不需要的是________(填序號(hào))。 ①酒精燈?、谂囵B(yǎng)皿?、埏@微鏡　④無(wú)菌水 (2)在涂布平板時(shí)，滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過(guò)多的原因是__________ ________________________。 (3)向試管內(nèi)分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時(shí)，若試管口粘附有培養(yǎng)基，需要用酒精棉球擦凈的原因是________________________________________________________________________ ________________________。 (4)剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不與纖維素降解產(chǎn)物纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩到了幾株有透明降解圈的菌落(見(jiàn)右圖)。圖中降解圈大小與纖維素酶的________有關(guān)。圖中降解纖維素能力最強(qiáng)的菌株是__________(填圖中序號(hào))。 (5)研究人員用篩選到的纖維素酶高產(chǎn)菌株J1和J4，在不同溫度和pH條件下進(jìn)行發(fā)酵，測(cè)得發(fā)酵液中酶活性的結(jié)果見(jiàn)下圖，推測(cè)菌株________更適合用于人工瘤胃發(fā)酵，理由是 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 解析：(1)在樣品稀釋和涂布平板過(guò)程中，需要在酒精燈火焰附近進(jìn)行操作，培養(yǎng)皿用于盛放培養(yǎng)基并培養(yǎng)細(xì)菌，無(wú)菌水做稀釋的溶劑，此處唯一用不到的是顯微鏡。(2)在涂布平板時(shí)，要取少量菌懸液滴加到培養(yǎng)基表面，因?yàn)槿绻渭泳鷳乙毫窟^(guò)多，菌懸液就會(huì)堆積在培養(yǎng)基表面影響分離效果。(3)在向試管內(nèi)分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時(shí)，如果試管口粘附有培養(yǎng)基，就很容易使棉塞受到污染，因此，需要用無(wú)菌的酒精棉球?qū)⒃嚬芸诓潦酶蓛簟?4)因?yàn)閯偣t可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，且不與纖維素降解產(chǎn)物反應(yīng)。所以在剛果紅培養(yǎng)基平板上，菌落周圍有透明降解圈是纖維素被降解的結(jié)果，降解圈大小由纖維素酶的活性和量決定。圖中菌落①周圍的降解圈最大，因此其降解纖維素的能力最強(qiáng)。(5)考慮到人工瘤胃的發(fā)酵過(guò)程會(huì)使發(fā)酵液酸性增加，溫度升高，在這個(gè)前提下觀察在不同溫度和pH條件下測(cè)得的發(fā)酵液中酶活性的結(jié)果圖，從圖中可以看出，在高溫和低pH條件下都是J4菌株中的纖維素酶的活性較高，因而該菌株更適合用于人工瘤胃發(fā)酵。 答案：(1)③　(2)培養(yǎng)基表面的菌懸液會(huì)出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，影響分離效果　(3)避免培養(yǎng)基污染棉塞 (4)量與活性?、佟?5)J4　發(fā)酵過(guò)程會(huì)產(chǎn)熱和產(chǎn)酸，J4菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高 [課下模擬練—自我檢測(cè)] 一、選擇題 1．消毒和滅菌是兩個(gè)不同的概念。下列各項(xiàng)中必須進(jìn)行滅菌處理的是(　　) A．牛奶　　　　　　　　　 B．培養(yǎng)基 C．離體培養(yǎng)的植物組織 D．注射藥物時(shí)的皮膚 解析：選B　培養(yǎng)基必須用高壓蒸汽法進(jìn)行滅菌。 2．產(chǎn)生每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌落的細(xì)菌的最初數(shù)目和培養(yǎng)基分別是(　　) A．一個(gè)細(xì)菌，液體培養(yǎng)基 B．許多細(xì)菌，液體培養(yǎng)基 C．一個(gè)細(xì)菌，固體培養(yǎng)基 D．許多細(xì)菌，固體培養(yǎng)基 解析：選C　在微生物的培養(yǎng)中產(chǎn)生每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌落的細(xì)菌的最初數(shù)目是一個(gè)細(xì)菌，用的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基。 3．某研究小組從有機(jī)廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是(　　) A．培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌 B．轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進(jìn)行劃線 C．接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng) D．培養(yǎng)過(guò)程中每隔一周觀察一次 解析：選B　培養(yǎng)微生物過(guò)程中應(yīng)先滅菌再倒平板；每一次劃線前都要進(jìn)行接種環(huán)的灼燒滅菌；接種后的培養(yǎng)皿應(yīng)在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，光照會(huì)影響溫度等條件；培養(yǎng)過(guò)程中觀察間隔的時(shí)間一般不超過(guò)24 h。 4．已知某種細(xì)菌以CO2為唯一碳源，下列相關(guān)敘述正確的是(　　) A．可推測(cè)該細(xì)菌的代謝類型為自養(yǎng)需氧型 B．無(wú)機(jī)鹽是該細(xì)菌不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) C．培養(yǎng)過(guò)程中碳源同時(shí)充當(dāng)該細(xì)菌的能源物質(zhì) D．培養(yǎng)該細(xì)菌的培養(yǎng)基中無(wú)需添加氮源 解析：選B　某種細(xì)菌以CO2為唯一碳源，可推測(cè)該細(xì)菌的代謝類型為自養(yǎng)型，但不確定是否為需氧型；無(wú)機(jī)鹽參與復(fù)雜有機(jī)物的組成，是該細(xì)菌不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；CO2不能作為能源；氮元素參與核酸、蛋白質(zhì)的組成，培養(yǎng)該細(xì)菌的培養(yǎng)基中需要添加氮源。 5．(2019宿遷模擬)下列關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．操作順序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌 B．將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯 C．待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右(剛剛燙手)時(shí)進(jìn)行倒平板 D．待平板冷卻凝固約5～10 min后將平板倒過(guò)來(lái)放置 解析：選A　制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板；將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯，加入少量的水，加熱；待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板；待平板冷卻凝固約5～10 min后將平板倒過(guò)來(lái)放置，以防止水蒸氣凝集滴入培養(yǎng)基。 6．(2019南通考前卷)高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實(shí)用性。研究者從熱泉中篩選了高效產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過(guò)程如圖所示。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是(　　) A．①過(guò)程的目的是稀釋 B．②過(guò)程所使用的接種方法是稀釋涂布平板法 C．Ⅰ號(hào)、Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基都屬于固體培養(yǎng)基，先滅菌后調(diào)節(jié)pH D．從Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基挑出透明圈大的菌落，接種到Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基上 解析：選C　圖中①過(guò)程是稀釋嗜熱菌培養(yǎng)液的過(guò)程；接種嗜熱菌即②過(guò)程所使用的接種方法是稀釋涂布平板法；分析圖示信息可知，Ⅰ號(hào)、Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基都屬于固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配制和滅菌過(guò)程中，應(yīng)注意先調(diào)節(jié)pH后滅菌；部分嗜熱菌在Ⅰ培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)可產(chǎn)生淀粉酶，分解培養(yǎng)基中的淀粉后會(huì)在菌落周圍形成透明圈，透明圈越大，說(shuō)明產(chǎn)生的淀粉酶越多，因此應(yīng)挑選透明圈大的菌落接種在Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。 7．養(yǎng)殖池中存在的有毒物質(zhì)主要是氨及亞硝酸，這兩種物質(zhì)可被硝化細(xì)菌吸收利用。在“養(yǎng)殖池底泥中硝化細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)中(　　) A．需要配制添加一定濃度氨鹽的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，以篩選硝化細(xì)菌 B．應(yīng)對(duì)采集底泥使用的工具進(jìn)行滅菌，全部接種過(guò)程均需在酒精燈火焰旁進(jìn)行 C．可以采用平板劃線法進(jìn)行接種，還需與未接種的空白培養(yǎng)基同時(shí)培養(yǎng) D．應(yīng)將培養(yǎng)基置于30 ℃恒溫下培養(yǎng)12 h后，統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)基中全部菌落數(shù) 解析：選B　分離硝化細(xì)菌應(yīng)用以銨鹽為唯一氮源的培養(yǎng)基，牛肉膏蛋白胨本身含有氮源，無(wú)法篩選硝化細(xì)菌；平板劃線法可以分離菌種，但不能用于計(jì)數(shù)；應(yīng)將培養(yǎng)基置于37 ℃恒溫下培養(yǎng)24～48 h，培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)每隔一段時(shí)間觀察，直到菌落穩(wěn)定時(shí)開(kāi)始計(jì)數(shù)。 8．下列有關(guān)菌種保藏的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．頻繁使用的菌種，可用斜面培養(yǎng)基保藏在4 ℃的冰箱中 B．臨時(shí)保藏菌種的培養(yǎng)基不需要定期更換 C．長(zhǎng)期保藏的菌種，需要降低代謝和變異發(fā)生概率 D．長(zhǎng)期保藏菌種時(shí)，可各取1 mL滅菌甘油和培養(yǎng)菌液混合后保存在冷凍箱中 解析：選B　頻繁使用的菌種，可用斜面培養(yǎng)基保藏在4 ℃的冰箱中臨時(shí)保藏，但需要定期更換培養(yǎng)基，以保證營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的供應(yīng)；長(zhǎng)期保藏的菌種，需要采用1 mL滅菌甘油和培養(yǎng)菌液混合后保存在冷凍箱中進(jìn)行甘油管藏，降低代謝和變異發(fā)生的概率。 9．(2019南通一模)下列檢測(cè)某熟制食品中大腸桿菌是否超標(biāo)的實(shí)驗(yàn)操作，不合理的是(　　) A．待檢測(cè)食品需要經(jīng)過(guò)滅菌操作后取樣檢測(cè) B．應(yīng)設(shè)置未接種的培養(yǎng)基，作為實(shí)驗(yàn)的對(duì)照 C．用稀釋涂布平板法接種計(jì)數(shù)大腸桿菌的活菌數(shù) D．接種后將培養(yǎng)皿倒置并在適宜溫度下培養(yǎng) 解析：選A　待檢測(cè)食品滅菌后會(huì)將大腸桿菌殺死，則不能檢測(cè)大腸桿菌是否超標(biāo)。 10．下列有關(guān)常見(jiàn)無(wú)菌操作的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．用酒精擦拭雙手 B．用氯氣對(duì)水源消毒 C．實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行 D．玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)可用酒精擦拭 解析：選D　用酒精擦拭雙手屬于使用化學(xué)藥劑消毒；用氯氣消毒水源也屬于使用化學(xué)藥劑消毒；實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行，因?yàn)楦邷乜煞乐闺s菌污染；玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)等應(yīng)用干熱滅菌法滅菌，利用酒精擦拭不能將所有微生物殺滅。 11．(2019揚(yáng)州模擬)如圖中甲是稀釋涂布平板法中的部分操作，乙是平板劃線法的操作結(jié)果。下列敘述中錯(cuò)誤的是(　　) A．甲中涂布前要將涂布器灼燒，冷卻后才能取菌液 B．甲、乙操作中只有甲可以用于微生物的計(jì)數(shù) C．乙中接種環(huán)需要灼燒5次 D．乙中的連續(xù)劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端 解析：選C　甲圖中的涂布前要將涂布器灼燒，冷卻后才能取菌液；甲是稀釋涂布分離法，可以用于微生物的計(jì)數(shù)，劃線分離法無(wú)法計(jì)數(shù)；乙中接種環(huán)需要灼燒6次；每次劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端。 12．如圖是研究人員從紅棕壤中篩選高效分解尿素細(xì)菌的過(guò)程示意圖，有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　) A．在配制步驟②③的培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)先調(diào)pH后高壓蒸汽滅菌 B．步驟③純化分解尿素的原理是將聚集的細(xì)菌分散，可以獲得單細(xì)胞菌落 C．步驟③采用涂布平板法接種，并需向牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入尿素 D．步驟④是挑?、壑胁煌N的菌落分別接種，比較細(xì)菌分解尿素的能力 解析：選C　制備固體培養(yǎng)基的主要步驟：計(jì)算→稱量→溶解→調(diào)pH→高壓蒸氣滅菌→倒平板；篩選高效分解尿素細(xì)菌只能以尿素為唯一氮源，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中含有氮源，不適合。 13．(多選)下列有關(guān)“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．高壓蒸汽滅菌鍋加蓋時(shí)應(yīng)按順時(shí)針?lè)较蛞来涡o螺栓 B．選擇培養(yǎng)基可以鑒定某種微生物的種類 C．待培養(yǎng)基冷卻至室溫時(shí)倒平板 D．統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)量時(shí)，接種方法可采用稀釋涂布平板法 解析：選ABC　高壓蒸汽滅菌鍋加蓋時(shí)，將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)，再以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致；鑒別培養(yǎng)基可以鑒定培養(yǎng)基中某種微生物的種類；待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右時(shí)倒平板。 14．(2019徐州一中模擬，多選)下表為某微生物培養(yǎng)基的配方，以下說(shuō)法正確的是(　　) 成分 含量 成分 含量 NaNO3 3 g K2HPO4 1 g KCl 0.5 g MgSO47H2O 0.5 g FeSO4 0.01g (CH2O) 30 g 青霉素 0.1萬(wàn)單位 H2O 1 000 mL A．該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基 B．該培養(yǎng)基不適合培養(yǎng)細(xì)菌 C．該培養(yǎng)基可培養(yǎng)異養(yǎng)型微生物 D．該培養(yǎng)基中的碳源也可給培養(yǎng)的微生物提供能源 解析：選BCD　分析表格，培養(yǎng)基配方中沒(méi)有加入瓊脂作為凝固劑，因此屬于液體培養(yǎng)基；加入青霉素會(huì)抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖，因此該培養(yǎng)基不適合培養(yǎng)細(xì)菌；該培養(yǎng)基中加入(CH2O)作為有機(jī)碳源，因此所培養(yǎng)微生物的同化作用的類型是異養(yǎng)；該培養(yǎng)基中的碳源是(CH2O)，該有機(jī)物也可以為培養(yǎng)的微生物提供能源。 15．(2019海安高級(jí)中學(xué)模擬，多選)抗生素可由微生物產(chǎn)生，具有抑菌作用，能在瓊脂培養(yǎng)基中擴(kuò)散。在篩選產(chǎn)生抗生素的菌種時(shí)，先在瓊脂培養(yǎng)基平板上劃線接種從土壤中獲得的甲菌，在27 ℃下培養(yǎng)3天，形成菌落。然后接種乙、丙、丁三種致病菌(圖a)，繼續(xù)在同樣條件下培養(yǎng)3天，結(jié)果如圖b。分析結(jié)果，可得出的結(jié)論是(　　) A．甲菌產(chǎn)生了抗生素 B．丙菌的生長(zhǎng)被乙菌產(chǎn)生的抗生素抑制 C．乙菌的生長(zhǎng)被甲菌產(chǎn)生的抗生素抑制 D．丁菌產(chǎn)生的抗生素抑制了丙菌的生長(zhǎng) 解析：選AC　分析培養(yǎng)結(jié)果(圖b)可知，乙、丙、丁三種致病菌不會(huì)產(chǎn)生抗生素，否則靠近乙、丙、丁的甲菌落不能生長(zhǎng)。進(jìn)一步由b圖可知，乙菌的生長(zhǎng)被抑制，最可能的原因是甲菌產(chǎn)生了抗生素，此種抗生素只能抑制乙菌的生長(zhǎng)，而對(duì)丙、丁兩種菌沒(méi)有影響。 二、非選擇題 16．(2019金湖中學(xué)模擬)炭疽桿菌能引起人畜患炭疽病。對(duì)炭疽病疑似患者，可通過(guò)圖1所示鑒定炭疽桿菌的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行確診。下表是培養(yǎng)炭疽桿菌的血瓊脂培養(yǎng)基成分，其中實(shí)驗(yàn)組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽桿菌?；卮鹣铝袉?wèn)題： 蛋白胨 牛肉膏 (粉) 氯化鈉 脫纖維羊血(含 多種生長(zhǎng)因子) 瓊脂 去離子水 10 g 3 g 5 g 50 mL 15 g 1 000 mL (1)根據(jù)表格內(nèi)容分析，血瓊脂培養(yǎng)基屬于____________(多選)?！、偻ㄓ门囵B(yǎng)基?、谶x擇培養(yǎng)基　③固體培養(yǎng)基?、芤后w培養(yǎng)基 (2)由表可知，微生物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有__________________________________________。為從炭疽病疑似患者體內(nèi)分離出炭疽桿菌，將采集到的患者皮膚膿胞滲出物稀釋后取0.1 mL滴于培養(yǎng)基表面，用無(wú)菌涂布器(玻璃刮鏟)涂勻，這種接種方法稱為_(kāi)___________________。圖2所示的四種菌落分布圖中，不可能由該方法得到的是________________。 (3)制備圖1中的液體培養(yǎng)基時(shí)需采取____________法滅菌，目的是________________________。裝桶時(shí)不要裝得太擠，以免________________________________________________________________________。 (4)據(jù)圖1分析，接種可疑菌后，經(jīng)35 ℃培養(yǎng)24小時(shí)，液體培養(yǎng)基變渾濁，原因是____________________________。對(duì)照組試管中應(yīng)加入____________________，與實(shí)驗(yàn)組同時(shí)培養(yǎng)6小時(shí)后，若實(shí)驗(yàn)組液體培養(yǎng)基的渾濁度比對(duì)照組________(填“高”或“低”)，則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染；反之則排除。此實(shí)驗(yàn)依據(jù)的原理是__________________________。 (5)對(duì)排除的疑似患者及易感人群，可采取的最有效的預(yù)防措施是__________________。 解析：(1)根據(jù)表格內(nèi)容分析，該培養(yǎng)基含有牛肉膏、蛋白胨，是細(xì)菌的通用培養(yǎng)基，又因?yàn)楹协傊瑸楣腆w培養(yǎng)基。(2)由表可知，微生物生長(zhǎng)所需的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有四類：碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽(部分微生物需要特定的生長(zhǎng)因子)。稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。由圖中四種菌落分布情況可知，A、B、C都是采用稀釋涂布平板法得到的，而D是采用平板劃線法得到的。(3)制備圖1中的液體培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)該用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌，以殺死微生物及芽孢。裝桶時(shí)不要裝得太擠，以免妨礙蒸汽流通影響滅菌效果。(4)接種可疑菌后，經(jīng)35 ℃培養(yǎng)24小時(shí)，若液體培養(yǎng)基變渾濁，則原因是炭疽桿菌大量繁殖。對(duì)照組試管中應(yīng)加入等量生理鹽水，與實(shí)驗(yàn)組同時(shí)培養(yǎng)6小時(shí)后，若實(shí)驗(yàn)組液體培養(yǎng)基的渾濁度比對(duì)照組低，則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染；反之則排除。此實(shí)驗(yàn)根據(jù)的原理是實(shí)驗(yàn)組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽桿菌，使細(xì)菌死亡，溶液變澄清。(5)對(duì)排除的疑似患者及易感人群，可接種炭疽桿菌疫苗，刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體和記憶細(xì)胞而獲得免疫能力。 答案：(1)①③　(2)碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽(和生長(zhǎng)因子)　稀釋涂布平板法　D　(3)高壓蒸汽滅菌　殺死細(xì)菌及芽孢　妨礙蒸汽流通影響滅菌效果　(4)炭疽桿菌大量繁殖　等量生理鹽水　低　實(shí)驗(yàn)組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽桿菌，使細(xì)菌死亡，溶液變澄清　(5)接種(炭疽桿菌)疫苗 17．微生物接種是微生物培養(yǎng)中非常重要的技術(shù)環(huán)節(jié)。下圖是關(guān)于接種的操作步驟示意圖。請(qǐng)據(jù)圖回答有關(guān)問(wèn)題： (1)圖中接種工具的名稱是____________，步驟②中，灼燒后必須先將接種工具冷卻的原因是________________________________________________________。 (2)步驟③中進(jìn)行劃線操作的目的是______________，劃線時(shí)一般不能劃破培養(yǎng)基的原因可能是_______________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)分別用三個(gè)平板培養(yǎng)三種細(xì)菌(E.coli、S.albus、B.subtilis)，然后在培養(yǎng)基上分別滴一滴一定濃度的青霉素溶液，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間培養(yǎng)后，可以觀察到一圈清晰區(qū)，這是抑制細(xì)菌生長(zhǎng)所致。測(cè)量清晰區(qū)的直徑，數(shù)據(jù)如下表。 細(xì)菌 不同濃度甲抗生素條件下清晰區(qū)直徑(mm) 5 μg/mL 7.5 μg/mL 10 μg/mL 15 μg/mL 20 μg/mL E.coli 7 10 16 16 16 S.albus 0 5 8 13 17 B.subtilis 5 7 9 14 19 該實(shí)驗(yàn)的目的是_______________________________________________________。 從表中數(shù)據(jù)可以看出，10 μg/mL青霉素和20 μg/mL青霉素在抑制E.coli、S.albus上的區(qū)別是 ________________、____________________________________________________。 (4)利用選擇培養(yǎng)基可以篩選微生物，制備培養(yǎng)基時(shí)，滅菌和調(diào)pH的先后順序是____________________，在利用高壓蒸汽滅菌鍋對(duì)培養(yǎng)基滅菌時(shí)，鍋內(nèi)水加熱煮沸后，必須________________，以保證滅菌溫度達(dá)到121 ℃。 解析：(1)圖中的接種工具是接種環(huán)，步驟②中，灼燒后必須先將接種工具冷卻的原因是避免高溫殺死接種物。(2)步驟③是采用平板劃線法對(duì)微生物進(jìn)行接種，其中進(jìn)行劃線操作的目的是分離微生物(或分離細(xì)菌、分離菌種)。劃線時(shí)一般不能劃破培養(yǎng)基的原因可能有：微生物接種于裂口內(nèi)，攝取營(yíng)養(yǎng)受限，生長(zhǎng)空間變小，培養(yǎng)基的溝槽造成菌落形態(tài)改變，從而影響對(duì)菌落形態(tài)的觀察及特征鑒別。(3)依題意和表中信息可知：該實(shí)驗(yàn)的目的是探究不同濃度青霉素對(duì)不同細(xì)菌的抑制作用。在控制S.albus方面，20 μg/mL青霉素的效用是10 μg/mL青霉素的兩倍；在控制E.coli方面，10 μg/mL和20 μg/mL青霉素的效用沒(méi)有差異。(4)制備培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)先調(diào)pH，再滅菌。在利用高壓蒸汽滅菌鍋對(duì)培養(yǎng)基滅菌時(shí)，鍋內(nèi)水加熱煮沸后，必須將鍋內(nèi)冷空氣徹底排除，以保證滅菌溫度達(dá)到121 ℃。 答案：(1)接種環(huán)　避免高溫殺死接種物　(2)分離微生物　微生物接種于裂口內(nèi)，攝取營(yíng)養(yǎng)受限，生長(zhǎng)空間變小，培養(yǎng)基的溝槽造成菌落形態(tài)改變，從而影響對(duì)菌落形態(tài)的觀察及特征鑒別　(3)探究不同濃度青霉素對(duì)不同細(xì)菌的抑制作用　在抑制S.albus方面，20 μg/mL青霉素的效用是10 μg/mL青霉素的兩倍　在抑制E.coli方面，10 μg/mL和20 μg/mL青霉素的效用沒(méi)有差異　(4)先調(diào)pH，再滅菌　將鍋內(nèi)冷空氣徹底排除