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專(zhuān)題24　微生物的利用 挖命題 【考情探究】 考點(diǎn) 考向 要求 5年考情 預(yù)測(cè)熱度 考題示例 素養(yǎng)要素 難度 1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) 培養(yǎng)基與微生物的純化 實(shí)驗(yàn)與 探究 2018課標(biāo)全國(guó) Ⅱ,37,15分 科學(xué)思維、 社會(huì)責(zé)任 中 ★★★ 2 微生物的分離與計(jì)數(shù) 微生物的分離與計(jì)數(shù) 2018課標(biāo)全國(guó) Ⅰ,37,15分 中 ★★★ 分析解讀　本專(zhuān)題內(nèi)容一直是高考的命題熱點(diǎn),考查內(nèi)容集中在微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)、特定微生物數(shù)量的測(cè)定方法、培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用等;題目情境貼近生活或科技進(jìn)展,但試題答案落腳于教材主干知識(shí)。預(yù)計(jì)2020年高考中這種命題趨勢(shì)還將繼續(xù)存在。復(fù)習(xí)時(shí)應(yīng)注意對(duì)各種技術(shù)的系統(tǒng)理解和橫向?qū)Ρ?可將果酒、果醋與泡菜的制作、特定微生物的分離純化等實(shí)踐操作構(gòu)建過(guò)程模型,以加深對(duì)相關(guān)技術(shù)的記憶和理解。 【真題典例】 破考點(diǎn) 考點(diǎn)一　微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) 【考點(diǎn)集訓(xùn)】 考向　培養(yǎng)基與微生物的純化 　　　　　　 　　　　　　 　　　　　　 1.(2019屆吉林實(shí)驗(yàn)中學(xué)第三次月考,41,15分)下表是某同學(xué)列出的分離土壤中微生物的培養(yǎng)基配方,據(jù)此回答下列問(wèn)題: KH2PO4 Na2HPO4 MgSO47H2O 尿素 葡萄糖 瓊脂 14 g 2.1 g 0.2 g 10 g 10.0 g 15.0 g 將上述物質(zhì)溶解后,用蒸餾水定容到1 000 mL。 (1)從作用上看,該培養(yǎng)基屬于　　　　培養(yǎng)基,提供氮源的物質(zhì)是　　　　　,細(xì)菌能利用該氮源是由于體內(nèi)能合成　　　　酶。 (2)在對(duì)分離的能分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行鑒定時(shí),還需在培養(yǎng)基中加入　　　　指示劑,若指示劑變　　　　,說(shuō)明有目的菌株存在。 (3)為了測(cè)定微生物的數(shù)量,接種時(shí)應(yīng)采用　　　　　　　　法,某同學(xué)在4個(gè)培養(yǎng)基上分別接種稀釋倍數(shù)為106 的土壤樣液0.1 mL,培養(yǎng)后菌落數(shù)分別為180、155、176、129個(gè),則每升原土壤樣液中上述微生物的數(shù)量為　　　　　　個(gè),測(cè)定的活菌數(shù)比實(shí)際活菌數(shù)　　　　(填“低”“高”或“基本一致”)。 答案　(1)選擇(1分)　尿素　脲　(2)酚紅　紅　(3)稀釋涂布平板　1.61012　低 2.(2019屆寧夏育才中學(xué)第二次月考,37,15分)為了調(diào)查銀川市自來(lái)水水源地的水質(zhì)情況,某研究小組對(duì)該地自來(lái)水水樣中的大腸桿菌進(jìn)行了測(cè)定,請(qǐng)回答下列問(wèn)題: (1)該小組采用平板劃線法分離提純水樣中的細(xì)菌,劃線時(shí)在培養(yǎng)基上共畫(huà)了4個(gè)區(qū)域,則需要　　　　次灼燒接種環(huán)。在第二次及以后劃線時(shí),總是從上一次的末端開(kāi)始劃線,這樣做的目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (2)在純化菌種時(shí),所用的培養(yǎng)基都需要在接種前用　　　　　　　　　　法進(jìn)行滅菌。將1 mL水樣稀釋1 000倍,在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液,經(jīng)適宜條件下培養(yǎng)后,3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為51、50和49。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為　　　　　　　。要使該實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果可靠,還應(yīng)該同時(shí)在另一平板上接種　　　　　　　　作為對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 (3)菌種需臨時(shí)保藏時(shí),要先將菌種接種到試管的　　　　　　　培養(yǎng)基上,在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長(zhǎng)成后,將試管放入　　　　　冰箱中保藏。但此方法存在的缺點(diǎn)是　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (4)在培養(yǎng)時(shí),需將培養(yǎng)皿倒置并放在　　　　　　　　中。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行　　　　處理后才能丟棄。 答案　(1)5(1分)　將聚集的菌種逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌種的表面　(2)高壓蒸汽滅菌　5.0108　等量的無(wú)菌水　(3)固體斜面(1分)　4 ℃(1分)　保存的時(shí)間不長(zhǎng),菌種容易被污染或產(chǎn)生變異　(4)恒溫培養(yǎng)箱(1分)　 滅菌(1分) 考點(diǎn)二　微生物的分離與計(jì)數(shù) 【考點(diǎn)集訓(xùn)】 考向　微生物的分離與計(jì)數(shù) 　　　　　　 　　　　　　 　　　　　　 1.(2019屆湖北華中師大附中高三上學(xué)期期中,37,15分)為更好地解決冬季污水處理廠氨氮去除率低的問(wèn)題,某研究小組嘗試從海水中篩選在低溫下能高效去除氨氮的硝化細(xì)菌。將采集到的海水樣本加入液體培養(yǎng)基A(其氮源為氨態(tài)氮),放在24 ℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天,然后取少量培養(yǎng)液在固體培養(yǎng)基上涂布,得到三種形態(tài)、顏色均不相同的單菌落?；卮鹣铝袉?wèn)題: (1)液體培養(yǎng)基A應(yīng)選用的滅菌方法是　　　　　　(填“高壓蒸汽滅菌法”或“干熱滅菌法”),不選另外一種的原因是　 。 (2)在配制培養(yǎng)基A時(shí),對(duì)碳源的要求是　　　　　　　(填“提供有機(jī)碳源”或“不提供碳源”),理由是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (3)最后分離得到的單菌落有三種,其形態(tài)、顏色各不相同,表明硝化細(xì)菌　　　　　　　　　　。 (4)該研究小組在上述實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,已經(jīng)獲得了高效去除氨氮的硝化細(xì)胞,則需要經(jīng)過(guò)　　　　處理,才能篩選出符合要求的能高效去除氨氮的硝化細(xì)菌。 答案　(1)高壓蒸汽滅菌法(2分)　干熱滅菌法針對(duì)耐高溫需要保持干燥的物品,若選干熱滅菌法會(huì)使培養(yǎng)基中的水分蒸發(fā)(3分)　(2)不提供碳源(2分)　硝化細(xì)菌能進(jìn)行化能合成作用,為自養(yǎng)生物(3分)　 (3)存在不同的種類(lèi)(3分)　(4)低溫(2分) 2.(2019屆四川南充一診,37,15分)有機(jī)磷農(nóng)藥是用于防治植物害蟲(chóng)的含磷有機(jī)化合物,廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中,有時(shí)會(huì)造成瓜果蔬菜等食品農(nóng)藥殘留超標(biāo),不少品種對(duì)人、畜的毒性很強(qiáng),人誤食后如不及時(shí)醫(yī)治就會(huì)危及生命。某班同學(xué)欲從土壤中分離高效降解有機(jī)磷農(nóng)藥的微生物。請(qǐng)回答下列問(wèn)題: (1)為了獲得能降解有機(jī)磷農(nóng)藥的微生物菌種,可在被有機(jī)磷農(nóng)藥污染的土壤中取樣,并在含有碳源、氮源及 　　　　　　　等的選擇培養(yǎng)基上添加適量的　　　　　　　進(jìn)行選擇培養(yǎng)。 (2)在制備固體培養(yǎng)基時(shí)需加入的常用凝固劑是　　　　。若培養(yǎng)基需要調(diào)節(jié)pH,則應(yīng)在滅菌之　　　　(填“前”或“后”)調(diào)節(jié)。 (3)該小組在接種前,隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時(shí)間,這樣做的目的是　　　　　　　　　　　 　　　　。 (4)若要測(cè)定培養(yǎng)液中選定菌種的菌體數(shù),既可在顯微鏡下用　　　　　　　　　直接計(jì)數(shù),也可選用　　　 　　　　　　法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目。 (5)將獲得的3種待選微生物菌種甲、乙、丙分別接種在1 L含20 mg有機(jī)磷農(nóng)藥的相同培養(yǎng)液中培養(yǎng)(培養(yǎng)液中其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充裕、條件適宜),觀察從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始到微生物停止生長(zhǎng)所用的時(shí)間,甲、乙、丙分別為32小時(shí)、45小時(shí)、16小時(shí),則應(yīng)選擇微生物　　　　(填“甲”“乙”或“丙”)作為菌種進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng),理由是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 答案　(1)水和無(wú)機(jī)鹽　有機(jī)磷農(nóng)藥　(2)瓊脂　前　(3)檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格　(4)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板　稀釋涂布平板　(5)丙　微生物丙分解有機(jī)磷農(nóng)藥的能力比甲、乙強(qiáng) 過(guò)專(zhuān)題 【五年高考】 A組　統(tǒng)一命題課標(biāo)卷題組 1.(2018課標(biāo)全國(guó)Ⅰ,37,15分)將馬鈴薯去皮切塊,加水煮沸一定時(shí)間,過(guò)濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖和瓊脂,用水定容后滅菌,得到M培養(yǎng)基。 回答下列問(wèn)題: (1)M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選,則培養(yǎng)基中應(yīng)加入鏈霉素以抑制　　　的生長(zhǎng),加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于 　　　　培養(yǎng)基。 (2)M培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長(zhǎng)提供了多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)類(lèi)型除氮源外還有　　　　　　(答出兩點(diǎn)即可)。氮源進(jìn)入細(xì)胞后,可參與合成的生物大分子有　　　　　　　　(答出兩點(diǎn)即可)。 (3)若在M培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖,接種土壤濾液并培養(yǎng),平板上長(zhǎng)出菌落后可通過(guò)加入顯色劑篩選出能產(chǎn)淀粉酶的微生物。加入的顯色劑是　　　,該方法能篩選出產(chǎn)淀粉酶微生物的原理是　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (4)甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量,在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果: 甲同學(xué)涂布了3個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是110、140和149,取平均值133; 乙同學(xué)涂布了3個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是27、169和176,取平均值124。 有人認(rèn)為這兩位同學(xué)的結(jié)果中,乙同學(xué)的結(jié)果可信度低,其原因是　　　　　　　　　　　　　　　。 答案　(1)細(xì)菌　選擇　(2)碳源、無(wú)機(jī)鹽　蛋白質(zhì)、核酸 (3)碘液　淀粉遇碘液顯藍(lán)色,產(chǎn)淀粉酶的菌落周?chē)矸郾凰?形成透明圈　(4)乙同學(xué)的結(jié)果中,1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個(gè)相差懸殊,結(jié)果的重復(fù)性差 2.(2018課標(biāo)全國(guó)Ⅱ,37,15分)在生產(chǎn)、生活和科研實(shí)踐中,經(jīng)常通過(guò)消毒和滅菌來(lái)避免雜菌的污染。 回答下列問(wèn)題: (1)在實(shí)驗(yàn)室中,玻璃和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具　　　　(填“可以”或“不可以”)放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌。 (2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時(shí)消毒法,與煮沸消毒法相比,這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (3)密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒,其原因是紫外線能　　　　　　　　　。在照射前,適量噴灑　　　　　　,可強(qiáng)化消毒效果。 (4)水廠供應(yīng)的自來(lái)水通常是經(jīng)過(guò)　　　　(填“氯氣”“乙醇”或“高錳酸鉀”)消毒的。 (5)某同學(xué)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí),若壓力達(dá)到設(shè)定要求,而鍋內(nèi)并沒(méi)有達(dá)到相應(yīng)溫度,最可能的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 答案　(1)可以　(2)在達(dá)到消毒目的的同時(shí),營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失較少　(3)破壞DNA結(jié)構(gòu)　消毒液　(4)氯氣　(5)未將鍋內(nèi)冷空氣排盡 3.(2018課標(biāo)全國(guó)Ⅲ,37,15分)回答下列與酵母菌有關(guān)的問(wèn)題: (1)分離培養(yǎng)酵母菌通常使用　　　　　　　(填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“麥芽汁瓊脂”)培養(yǎng)基,該培養(yǎng)基應(yīng)采用　　　　　　滅菌法滅菌。若將酵母菌劃線接種在平板上,培養(yǎng)一段時(shí)間后可觀察到菌落,菌落的含義是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (2)酵母菌液體培養(yǎng)時(shí),若通入氧氣,可促進(jìn)　　　　　　　(填“菌體快速增殖”“乙醇產(chǎn)生”或“乳酸產(chǎn)生”);若進(jìn)行厭氧培養(yǎng),可促進(jìn)　　　　　　(填“菌體快速增殖”“乙醇產(chǎn)生”或“乳酸產(chǎn)生”)。 (3)制作面包時(shí),為使面包松軟通常要在面粉中添加一定量的酵母菌,酵母菌引起面包松軟的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 答案　(1)麥芽汁瓊脂　高壓蒸汽　由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體　(2)菌體快速增殖　乙醇產(chǎn)生　(3)酵母菌分解葡萄糖會(huì)產(chǎn)生CO2,CO2使面包松軟 4.(2017課標(biāo)全國(guó)Ⅰ,37,15分)某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和NH3,供植物吸收和利用。回答下列問(wèn)題: (1)有些細(xì)菌能分解尿素,有些細(xì)菌則不能,原因是前者能產(chǎn)生　　　。能分解尿素的細(xì)菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源,原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。但可用葡萄糖作為碳源,進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　(答出兩點(diǎn)即可)。 (2)為了篩選可分解尿素的細(xì)菌,在配制培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)選擇　　　(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”)作為氮源,不選擇其他兩組的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (3)用來(lái)篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4,其作用有　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　(答出兩點(diǎn)即可)。 答案　(1)脲酶　分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物,不能利用CO2來(lái)合成有機(jī)物　為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量,為其他有機(jī)物的合成提供原料 (2)尿素　其他兩組都含有NH4NO3,能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3,不能起到篩選作用 (3)為細(xì)菌生長(zhǎng)提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng),作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH穩(wěn)定 5.(2016課標(biāo)全國(guó)Ⅲ,39,15分,0.24)某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實(shí)驗(yàn)材料分離純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明,乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；卮鹣铝袉?wèn)題: (1)分離純化乳酸菌時(shí),首先需要用　　　　對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋,進(jìn)行梯度稀釋的理由是　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (2)推測(cè)在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有　　　　　　　　　　　　和　　　　　　　　。分離純化時(shí)應(yīng)挑選出　　　　　　　　　　　　的菌落作為候選菌。 (3)乳酸菌在-20 ℃長(zhǎng)期保存時(shí),菌液中常需要加入一定量的　　　　(填“蒸餾水”、“甘油”或“碳酸鈣”)。 答案　(1)無(wú)菌水(2分)　泡菜濾液中菌的濃度高,直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落(3分) (2)鑒別乳酸菌　中和產(chǎn)生的乳酸(或酸)(每空3分,共6分)　具有透明圈(2分) (3)甘油(2分) 6.(2015課標(biāo)全國(guó)Ⅰ,39,15分,0.6127)已知微生物A可以產(chǎn)生油脂,微生物B可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)?；卮鹩嘘P(guān)問(wèn)題: (1)顯微觀察時(shí),微生物A菌體中的油脂通?？捎谩　　　∪旧?。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā),可選用　　 　　(填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”)從菌體中提取。 (2)為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落,可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣,并應(yīng)選用以　　　　為碳源的固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。 (3)若要測(cè)定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù),可在顯微鏡下用　　　　　直接計(jì)數(shù);若要測(cè)定其活菌數(shù)量,可選用　　　　　　法進(jìn)行計(jì)數(shù)。 (4)為了確定微生物B產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度,某同學(xué)測(cè)得相同時(shí)間內(nèi),在35 ℃、40 ℃、45 ℃溫度下降解10 g油脂所需酶量依次為4 mg、1 mg、6 mg,則上述三個(gè)溫度中,　　　　℃條件下該酶活力最小。為了進(jìn)一步確定該酶的最適溫度,應(yīng)圍繞　　　　℃設(shè)計(jì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 答案　(1)蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ)　萃取法(每空2分,共4分) (2)油脂(3分) (3)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板　稀釋涂布平板(每空2分,共4分) (4)45　40(每空2分,共4分) 7.(2014課標(biāo)全國(guó)Ⅰ,39,15分,0.5106)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝袉?wèn)題: (1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶,該酶是由3種組分組成的復(fù)合酶,其中的葡萄糖苷酶可將 　　　　分解成　　　　。 (2)在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時(shí),CR可與纖維素形成　　　　色復(fù)合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí),培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的　　　　。 (3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落,某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成分見(jiàn)下表): 酵母膏 無(wú)機(jī)鹽 淀粉 纖維素粉 瓊脂 CR溶液 水 培養(yǎng)基甲 + + + + - + + 培養(yǎng)基乙 + + + - + + + 注:“+”表示有,“-”表示無(wú)。 據(jù)表判斷,培養(yǎng)基甲　　　　(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌,原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　;培養(yǎng)基乙　　　　(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌,原因是　 　。 答案　(1)纖維二糖　葡萄糖　(2)紅　透明圈　(3)不能　液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落　不能　培養(yǎng)基中沒(méi)有纖維素,不會(huì)形成CR—纖維素紅色復(fù)合物,即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌 8.(2014課標(biāo)全國(guó)Ⅱ,39,15分,0.5527)為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況,某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)菌含量,并進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作?；卮鹣铝袉?wèn)題: (1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前,隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間,這樣做的目的是　; 然后,將1 mL水樣稀釋100倍,在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液;經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后,3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為　　　　。 (2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí),接種環(huán)通過(guò)　　　　滅菌,在第二次及以后的劃線時(shí),總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線。這樣做的目的是　 。 (3)示意圖A和B中,　　　　表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。 (4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻,一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng),另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn):振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是:振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中　　　的含量,同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸,提高　　　　　　的利用率。 答案　(15分)(1)檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格　3.8107(每空2分,共4分) (2)灼燒(2分)　將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落(3分) (3)B(2分) (4)溶解氧　營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(每空2分,共4分) 教師用書(shū)專(zhuān)用(9—11) 9.(2013課標(biāo)全國(guó)Ⅱ,39,15分,0.5633)臨床使用抗生素前,有時(shí)需要做細(xì)菌耐藥實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí),首先要從病人身上獲取少量樣本,然后按照一定的實(shí)驗(yàn)步驟操作,以確定某致病菌對(duì)不同抗生素的敏感性。 回答下列問(wèn)題: (1)為了從樣本中獲取致病菌單菌落,可用　　　　法或　　　　法將樣本接種于固體培養(yǎng)基表面,經(jīng)過(guò)選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。 (2)取該單菌落適當(dāng)稀釋,用　　　　法接種于固體培養(yǎng)基表面,在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,使其均勻生長(zhǎng),布滿平板。 (3)為了檢測(cè)該致病菌對(duì)于抗生素的敏感性,將分別含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置,培養(yǎng)一段時(shí)間后,含A的濾紙片周?chē)霈F(xiàn)透明圈,說(shuō)明該致病菌對(duì)抗生素A　　　　;含B的濾紙片周?chē)鷽](méi)有出現(xiàn)透明圈,說(shuō)明該致病菌對(duì)抗生素B　　　　;含C的濾紙片周?chē)耐该魅Ρ群珹的小,說(shuō)明　; 含D的濾紙片周?chē)耐该魅σ脖群珹的小,且透明圈中出現(xiàn)了一個(gè)菌落,在排除雜菌污染的情況下,此菌落很可能是抗生素D的　　　　。 (4)根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果,為達(dá)到抗菌目的,最好應(yīng)選用抗生素　　　　。 答案　(15分) (1)劃線　稀釋涂布(或涂布)(每空2分,共4分) (2)涂布(1分) (3)敏感　不敏感　該致病菌對(duì)C的敏感性比對(duì)A的弱　耐藥菌(每空2分,共8分) (4)A(2分) 10.(2011課標(biāo),39,15分)有些細(xì)菌可分解原油,從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從受原油污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株?；卮饐?wèn)題: (1)在篩選過(guò)程中,應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以　　　　為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上。從功能上講,該培養(yǎng)基屬于　　　　培養(yǎng)基。 (2)純化菌種時(shí),為了得到單菌落,常采用的接種方法有兩種,即　　　　和　　　　。 (3)為了篩選出高效菌株,可比較單菌落周?chē)纸馊Φ拇笮?分解圈大說(shuō)明該菌株的降解能力　　　　。 (4)通常情況下,在微生物培養(yǎng)過(guò)程中,實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、　　　　和　　　　。無(wú)菌技術(shù)要求實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈　　　　附近進(jìn)行,以避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染。 答案　(1)原油　選擇 (2)平板劃線法　稀釋涂布平板法 (3)強(qiáng) (4)干熱滅菌　高壓蒸汽滅菌　火焰 11.(2009全國(guó)Ⅱ,33,10分)利用微生物分解玉米淀粉生產(chǎn)糖漿,具有廣闊的應(yīng)用前景。但現(xiàn)有野生菌株對(duì)淀粉的轉(zhuǎn)化效率低,某同學(xué)嘗試對(duì)其進(jìn)行改造,以獲得高效菌株。 (1)實(shí)驗(yàn)步驟: ①配制　　　　　　(固體、半固體、液體)培養(yǎng)基,該培養(yǎng)基的碳源應(yīng)為　　　　　　　　　　。 ②將　　　　接入已滅菌的培養(yǎng)基平板上。 ③立即用適當(dāng)劑量的紫外照射,其目的是　　　　　　　　　　。 ④菌落形成后,加入碘液,觀察菌落周?chē)囵B(yǎng)基的顏色變化和變化范圍的大小,周?chē)霈F(xiàn)　　　　　　　　　　現(xiàn)象的菌落即為初選菌落。經(jīng)分離、純化后即可達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹? (2)若已得到二株變異菌株Ⅰ和Ⅱ,其淀粉轉(zhuǎn)化率較高。經(jīng)測(cè)定菌株Ⅰ淀粉酶的催化活性高,菌株Ⅱ的淀粉酶蛋白含量高。經(jīng)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),突變發(fā)生在淀粉酶基因的編碼區(qū)或非編碼區(qū),可推測(cè)出菌株Ⅰ的突變發(fā)生在　　　　區(qū),菌株Ⅱ的突變發(fā)生在　　　　區(qū)。 答案　(1)①固體　玉米淀粉?、谝吧辍、蹖?duì)野生菌株進(jìn)行誘變　④淺色范圍大　(2)編碼　非編碼 B組　自主命題省(區(qū)、市)卷題組 1.(2018江蘇單科,31,8分)酵母的蛋白質(zhì)含量可達(dá)自身干重的一半,可作為飼料蛋白的來(lái)源。有些酵母可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培養(yǎng),這樣既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類(lèi)酵母,并進(jìn)行大量培養(yǎng)。下圖所示為操作流程,請(qǐng)回答下列問(wèn)題: (1)配制培養(yǎng)基時(shí),按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱量各組分,將其溶解、定容后,調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的　　　　,及時(shí)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行分裝,并進(jìn)行　　　　　　　　滅菌。 (2)取步驟②中不同梯度的稀釋液加入標(biāo)記好的無(wú)菌培養(yǎng)皿中,在步驟③中將溫度約　　　　(在25 ℃、50 ℃或80 ℃中選擇)的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻,冷凝后倒置培養(yǎng)。 (3)挑取分離平板中長(zhǎng)出的單菌落,按步驟④所示進(jìn)行劃線。下列敘述合理的有　　　　　　　。 a.為保證無(wú)菌操作,接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌 b.劃線時(shí)應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面,以免不能形成正常菌落 c.挑取菌落時(shí),應(yīng)挑取多個(gè)菌落,分別測(cè)定酵母細(xì)胞中甲醇的含量 d.可以通過(guò)逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度,獲得甲醇高耐受株 (4)步驟⑤中,為使酵母數(shù)量迅速增加,培養(yǎng)過(guò)程中需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和　　　　供應(yīng)。為監(jiān)測(cè)酵母的活細(xì)胞密度,將發(fā)酵液稀釋1 000 倍后,經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色,用2516型血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)5 個(gè)中格中的細(xì)胞數(shù),理論上　　　　色細(xì)胞的個(gè)數(shù)應(yīng)不少于　　　　,才能達(dá)到每毫升3109個(gè)活細(xì)胞的預(yù)期密度。 答案　(8分) (1)pH　高壓蒸汽(濕熱)　(2)50 ℃　(3)a、b、d (4)氧氣　無(wú)　30 2.(2017江蘇單科,31,7分)苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中,對(duì)環(huán)境有嚴(yán)重危害。小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)下圖操作步驟,從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請(qǐng)回答下列問(wèn)題: (1)酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水,其中可作為碳源的有　　　　　　　。 (2)將采集到的樣品接種培養(yǎng),苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸　　　　,以達(dá)到富集酚降解菌的目的。若如圖平板中菌落過(guò)于密集,應(yīng)進(jìn)一步　　　　　　,以便于菌落計(jì)數(shù)與分離。制備平板培養(yǎng)基時(shí)除了需要水、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外,還必須添加　　　　。 (3)如圖為連續(xù)劃線法示意圖,在圖中　　　　(填圖中序號(hào))區(qū)域更易獲得單菌落。 (4)采用比色測(cè)定法(使用苯酚顯色劑)檢測(cè)降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進(jìn)行顯色反應(yīng),下表中1~5號(hào)比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為　　　　　　　　。 管號(hào) 1 2 3 4 5 6 苯酚濃度(mg/L) 1 如果廢水為50 mg/L苯酚溶液,降解后約有21%的苯酚殘留,則需將殘留液稀釋　　　　(填序號(hào):①5?、?0?、?0)倍后,再進(jìn)行比色。 答案　(7分)(1)蛋白胨、苯酚　(2)增加　稀釋涂布　凝固劑　(3)③　(4)0、0.2、0.4、0.6、0.8?、? 【三年模擬】 非選擇題(共90分) 1.(2019屆湖南長(zhǎng)郡中學(xué)第二次月考,35)日前微博傳言手機(jī)細(xì)菌比馬桶多。如圖,央視和北京衛(wèi)視通過(guò)實(shí)驗(yàn)展示調(diào)查結(jié)果?；卮鹣铝邢嚓P(guān)問(wèn)題。(15分) (1)該實(shí)驗(yàn)需制備培養(yǎng)基,培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、　　　　　,培養(yǎng)基一般放入　　　　　　　　　中進(jìn)行滅菌。 (2)據(jù)圖,兩電視臺(tái)均采用　　　　　　　　　法接種,該方法需要 　　　　。(多選) A.接種環(huán)　B.酒精燈　C.移液管　D.涂布器　E.無(wú)菌水 (3)通過(guò)觀察菌落的　　　　　　　　,可知手機(jī)屏幕和馬桶按鈕都存在多種微生物。兩電視臺(tái)實(shí)驗(yàn)操作均正確且完全一致,但報(bào)道結(jié)果截然不同,你認(rèn)為原因是　　　　　　　　　　　　　　　　。 (4)按圖操作取樣面積,實(shí)驗(yàn)員測(cè)定某手機(jī)屏幕的細(xì)菌數(shù)量,將10 mL菌懸液進(jìn)行梯度稀釋,分別取0.1 mL稀釋倍數(shù)為102的樣品液接種到三個(gè)培養(yǎng)基上,培養(yǎng)一段時(shí)間后,統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)分別為48、50、52,則該手機(jī)屏幕的細(xì)菌數(shù)為　　　　　個(gè)/平方厘米。該實(shí)驗(yàn)對(duì)照組該如何設(shè)置?　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 答案　(1)無(wú)機(jī)鹽(1分,“瓊脂”不作為扣分或給分的標(biāo)準(zhǔn))　高壓蒸汽滅菌鍋　(2)稀釋涂布平板　BCDE(全對(duì)2分,答對(duì)2~3個(gè)得1分)　(3)形態(tài)、大小(答出一點(diǎn)即給2分,也可填“顏色”或其他合理答案)　 手機(jī)的取樣和馬桶的取樣都不相同 (答出“取樣不同”即得2分)　(4)2104　取培養(yǎng)基涂布0.1 mL無(wú)菌水進(jìn)行培養(yǎng) 2.(2019屆山東青島期初調(diào)研,36)蛋白酶在生物醫(yī)藥和日用化工等生產(chǎn)領(lǐng)域具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。某同學(xué)為篩選產(chǎn)蛋白酶的高產(chǎn)菌株,做了如下實(shí)驗(yàn)步驟(配制了下列培養(yǎng)基,在適宜條件下培養(yǎng)):(15分) 步驟 取樣 培養(yǎng)基 培養(yǎng)結(jié)果 Ⅰ 土壤樣品 葡萄糖,(NH4)2SO2,K2HPO43H2O,KH2PO4,NaCl,CaCl2,MgSO47H2O,加水定容 培養(yǎng)液a Ⅱ 1 mL培養(yǎng)液a 同上 菌落 Ⅲ 挑取單菌落 細(xì)菌培養(yǎng)基 培養(yǎng)液b (1)為實(shí)現(xiàn)篩選目的,步驟Ⅰ所使用的培養(yǎng)基配方中,應(yīng)去除　　　　　并加入高濃度的　　　　　。該培養(yǎng)基從功能上看屬于　　　　培養(yǎng)基。 (2)滅菌是否徹底或是否被污染需要檢測(cè),檢測(cè)方法是　　　　　 。 (3)為實(shí)現(xiàn)目的菌的分離和計(jì)數(shù),步驟Ⅱ所使用的培養(yǎng)基中還常加入　　　　制成平板,采用的接種方法是　　　　　　　　　　　　。 (4)步驟Ⅲ的目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　。 答案　(1)葡萄糖　蛋白質(zhì)　選擇　(2)未接種的培養(yǎng)基在適宜條件下放置一段時(shí)間后,觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生　(3)瓊脂　稀釋涂布平板法　(4)快速增加目的菌的種群數(shù)量(擴(kuò)大培養(yǎng)) 3.(2019屆黑龍江大慶實(shí)驗(yàn)中學(xué)第一次月考,44Ⅰ)酸雨主要是由大氣中所含的SO2造成的。研究人員為了獲得用于煙氣脫硫的脫硫細(xì)菌,進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。回答下列問(wèn)題:(15分) (1)采集菌種:在某熱電廠煙囪周?chē)鷧^(qū)域采集土樣,取樣用的小鐵鏟和盛裝土樣的信封在使用前都需要　　　　。將采集的土樣進(jìn)行稀釋處理后,接種到培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。 (2)分離目的菌:將目的菌轉(zhuǎn)移到含少量無(wú)菌水的錐形瓶中,邊攪拌邊持續(xù)通入SO2,馴化幾分鐘后接種到固體培養(yǎng)基上,待長(zhǎng)出菌落后再重復(fù)上述步驟,并逐步延長(zhǎng)通SO2的時(shí)間,與此同時(shí)逐步降低培養(yǎng)基的pH。由此分離得到的目的菌具有較強(qiáng)的　　　　　　　的能力。 (3)活菌計(jì)數(shù):為獲得大量目的菌用于生產(chǎn),在培養(yǎng)過(guò)程中需連續(xù)取樣進(jìn)行計(jì)數(shù),　　　　　　法常用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)目。通常情況下,用此方法得到的活菌數(shù)目往往比實(shí)際數(shù)目　　　　(填“高”或“低”)。 (4)檢測(cè)目的菌對(duì)抗生素的敏感性:取該單菌落適當(dāng)稀釋后的液體2滴,接種于固體培養(yǎng)基表面,并用　　　　使菌液均勻分布。在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后,將大小相同且分別含有不同抗生素的圓紙片均勻置于該平板的不同位置,再培養(yǎng)一段時(shí)間,結(jié)果如圖所示(圓紙片周?chē)陌咨珔^(qū)域表示沒(méi)有菌落分布),據(jù)此實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè),五種抗生素中對(duì)該菌抑制作用最強(qiáng)的是　　　　　(答序號(hào)和名稱)。 (5)菌種保存:采用平板劃線法分離純化得到了脫硫細(xì)菌,可以采用　　　　　　　的方法,對(duì)菌種長(zhǎng)期保存。 答案　(1)滅菌　(2)利用SO2和耐酸　(3)稀釋涂布平板　低　(4)涂布器?、萸嗝顾亍?5)甘油管藏 4.(2019屆安徽合肥高三調(diào)研,25)如圖是純化纖維素分解菌并生產(chǎn)乙醇的基本工作流程,請(qǐng)回答下列問(wèn)題:(15分) (1)圖中①過(guò)程選取富含纖維素的土壤,在鑒定和篩選所需微生物時(shí)需用　　　　　對(duì)纖維素進(jìn)行染色并制成選擇培養(yǎng)基。最后還要在平板培養(yǎng)基上分離純化目的菌。為避免雜菌污染培養(yǎng)物和環(huán)境,接種時(shí)要在 　　　　　　　　操作。 (2)圖中②環(huán)節(jié)獲得的酶是一種復(fù)合酶,一般認(rèn)為它至少包括三種組分,分別為C1酶、CX酶和　　　　　　　　。前兩種酶使纖維素分解成　　　　　　,第三種酶將其進(jìn)一步分解成葡萄糖。⑤環(huán)節(jié)常用的菌種是　　　　　。 (3)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中纖維素分解菌數(shù)量。在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中,取0.2 mL稀釋液涂布,得到以下統(tǒng)計(jì)結(jié)果:涂布了三個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是210、240和246;請(qǐng)計(jì)算每毫升原液中的菌體數(shù)是　　　　　　　。用這種方法測(cè)得的菌體數(shù)比實(shí)際活菌數(shù)量　　　　。 答案　(1)剛果紅　酒精燈火焰旁　(2)葡萄糖苷酶　纖維二糖　酵母菌　(3)1.16109　少 5.(2019屆河南信陽(yáng)高中一模,37)土壤中的細(xì)菌數(shù)量多、分布廣,人類(lèi)能根據(jù)需要從土壤中分離提純各種細(xì)菌,因此可以從土壤的枯枝敗葉層分離出纖維素分解菌?；卮鹣铝袉?wèn)題:(15分) (1)培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基除含有碳源外,還必須含有的基本成分是　　　　　　　　　　　　。 (2)為避免培養(yǎng)皿污染,需將倒平板后的培養(yǎng)皿呈　　　　狀態(tài)放置。為了排除培養(yǎng)基被污染,需設(shè)置接種等量　　　　　的培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。 (3)若要鑒別所分離的細(xì)菌是否為纖維素分解菌,則應(yīng)該在培養(yǎng)基中加入　　　　　　　,觀察培養(yǎng)基中是否出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈,從而可以鑒定是否篩選出纖維素分解菌。 (4)為避免培養(yǎng)液中菌體濃度過(guò)高,需將培養(yǎng)液進(jìn)行　　　　　　　　處理。為了測(cè)定培養(yǎng)液中的菌體數(shù)量,一般采用　　　　　　　法將一定量的菌液接種到固體培養(yǎng)基上,統(tǒng)計(jì)菌落的數(shù)量來(lái)代表菌體數(shù),這種檢測(cè)方法測(cè)得的結(jié)果一般偏小,原因是　　　　 。 答案　(1)氮源、水、無(wú)機(jī)鹽　(2)倒置　無(wú)菌水　(3)剛果紅染料　(4)梯度稀釋(或系列稀釋)　稀釋涂布平板　有些菌落是由兩個(gè)或多個(gè)活菌共同形成的(且有活菌在培養(yǎng)過(guò)程中死亡) 6.(2019屆江西新余四中第一次月考,34)為了調(diào)查某學(xué)校附近河流的水質(zhì)狀況,該學(xué)校生物興趣小組測(cè)定了河流水樣中的細(xì)菌含量,并進(jìn)行了細(xì)菌的分離等工作?；卮鹣铝袉?wèn)題:(15分) (1)如圖,該小組采用的是　　　　　　　分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí),接種環(huán)通過(guò)　　　　滅菌,在第二次及以后的操作時(shí),總是從上一次的末端開(kāi)始,這樣做的目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 (2)該實(shí)驗(yàn)組將接種好的培養(yǎng)皿在恒溫箱中培養(yǎng)時(shí)倒置,其目的是　　　　　　　　　　　　　　　。 (3)菌落是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。單個(gè)菌落在生態(tài)學(xué)中可以被稱為　　　　。根據(jù)培養(yǎng)皿上菌落的平均數(shù)可以計(jì)算河水中該細(xì)菌的密度,但計(jì)算的數(shù)據(jù)要比實(shí)際活菌的數(shù)目少,原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。除了上述的活菌計(jì)數(shù)法外,　　　　　　　　　　　　也是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法。 (4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻,一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng),另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn):振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是　　　　。 答案　(1)平板劃線法　灼燒　將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落　(2)防止凝結(jié)在皿蓋上水滴落在培養(yǎng)基上產(chǎn)生雜菌污染　(3)由一個(gè)細(xì)胞在固體培養(yǎng)基上繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群　種群(1分)　當(dāng)兩個(gè)或者多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)平板上觀察到的是一個(gè)菌落　顯微鏡直接計(jì)數(shù)　(4)振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液的溶解氧的含量(1分),同時(shí)可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸,提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率(1分)