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課時規(guī)范練33　無菌操作技術實踐 非選擇題 1.(2018全國Ⅰ理綜)將馬鈴薯去皮切塊,加水煮沸一定時間,過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖和瓊脂,用水定容后滅菌,得到M培養(yǎng)基。 回答下列問題。 (1)M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選,則培養(yǎng)基中應加入鏈霉素以抑制　　　　的生長,加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于　　　　培養(yǎng)基。 (2)M培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長提供了多種營養(yǎng)物質,營養(yǎng)物質類型除氮源外還有　　　　　　　　　(答出兩點即可)。氮源進入細胞后,可參與合成的生物大分子有　　　　　　　　　　(答出兩點即可)。 (3)若在M培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖,接種土壤濾液并培養(yǎng),平板上長出菌落后可通過加入顯色劑篩選出能產淀粉酶的微生物。加入的顯色劑是　　　　　,該方法能篩選出產淀粉酶微生物的原理是　 　。 (4)甲、乙兩位同學用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量,在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結果: 甲同學涂布了3個平板,統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是110、140和149,取平均值133。 乙同學涂布了3個平板,統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是27、169和176,取平均值124。 有人認為這兩位同學的結果中,乙同學的結果可信度低,其原因是 　。 答案(1)細菌　選擇 (2)碳源、無機鹽　蛋白質、核酸 (3)碘液　淀粉遇碘液顯藍色,產淀粉酶的菌落周圍淀粉被水解,形成透明圈 (4)乙同學的結果中,1個平板的計數(shù)結果與另2個相差懸殊,結果的重復性差 解析本題主要考查微生物的培養(yǎng)及計數(shù)方法。(1)鏈霉素可抑制細菌的生存,但真菌可以在含鏈霉素的培養(yǎng)基中生存,所以加入鏈霉素的培養(yǎng)基可用于篩選出真菌,屬于選擇培養(yǎng)基。(2)培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質主要有碳源、氮源、水和無機鹽等。蛋白質和核酸都含氮元素,所以氮源進入細胞后可用于合成蛋白質和核酸等大分子物質。(3)檢測淀粉所用的試劑是碘液,碘液遇碘變藍。如果某種微生物產生了淀粉酶,則在其菌落周圍就沒有淀粉存在,不再呈現(xiàn)藍色,而是出現(xiàn)透明圈。(4)計數(shù)時一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進行計數(shù)。乙同學1個平板的計數(shù)結果與另2個相差懸殊,可信度低。 2.有些細菌可分解原油,從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學欲從受原油污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株。回答問題: (1)在篩選過程中,應將土壤樣品稀釋液接種于以　　　　　　為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上,從功能上講,該培養(yǎng)基屬于　　　　　　培養(yǎng)基。 (2)純化菌種時,為了得到單菌落,常采用的接種方法有兩種,即　　　　　　　　　　和　　　　　　　　　　　　　　。 (3)為了篩選出高效菌株,可比較單菌落周圍分解圈的大小,分解圈大說明該菌株的降解能力　　　　。 (4)通常情況下,在微生物培養(yǎng)過程中,實驗室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、　　　　　　　　　　和　　　　　　　　　　　　　　。無菌技術要求實驗操作應在酒精燈　　　　　附近進行,以避免周圍環(huán)境中微生物的污染。 答案(1)原油　選擇 (2)平板劃線法　稀釋涂布平板法 (3)強 (4)干熱滅菌　高壓蒸汽滅菌　火焰 解析(1)在以原油為唯一碳源的培養(yǎng)基中,分解原油的細菌可以大量繁殖,而其他細菌不能生存。此種培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。 (2)純化菌種常用平板劃線法和稀釋涂布平板法。 (3)在以原油為唯一碳源的培養(yǎng)基上,在菌落周圍的原油被分解而形成分解圈,分解圈越大,說明該菌株降解能力越強。 (4)實驗室滅菌有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌,實驗操作要在酒精燈火焰附近的無菌區(qū)進行。 3.研究發(fā)現(xiàn)柚皮精油和乳酸菌素(小分子蛋白質)均有抑菌作用,兩者的提取及應用如圖所示。 (1)柚皮易焦糊,宜采用　　　　　　　法提取柚皮精油,該過程得到的糊狀液體可通過　　　　除去其中的固體雜質。 (2)篩選乳酸菌A時可選用平板劃線法或　　　　　　　　　　　　　　接種。對新配制的培養(yǎng)基滅菌時所用的設備是　　　　　　　　　　　　。實驗前需對超凈工作臺進行　　　　處理。 (3)培養(yǎng)基中的尿素可為乳酸菌A生長提供　　　　。電泳法純化乳酸菌素時,若分離帶電荷相同的蛋白質,則其分子量越大,電泳速度　　　　。 (4)抑菌實驗時,在長滿致病菌的平板上,會出現(xiàn)以抑菌物質為中心的透明圈?？赏ㄟ^測定透明圈的　　　　　　　　　　　　　　　來比較柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。 答案(1)壓榨　過濾 (2)稀釋涂布平板法　高壓蒸汽滅菌鍋　消毒 (3)氮源　越慢 (4)直徑(或大小) 解析柚皮精油宜采用壓榨法進行提取,要除去其中雜質可采用過濾法。培養(yǎng)基中的尿素可為乳酸菌提供氮源。電泳法分離蛋白質時相對分子質量越大,電泳速度越慢,反之則越快。培養(yǎng)基菌落透明圈直徑越大,說明柚皮精油和乳酸菌的抑菌效果越好。 4.現(xiàn)在大力提倡無紙化辦公,但是每年仍然不可避免地產生大量的廢紙。廢紙的主要成分是木質纖維,人類正努力將其轉化為一種新的資源——乙醇。下圖是工業(yè)上利用微生物由纖維素生產乙醇的基本工藝流程,請回答相關問題。 (1)自然界中①環(huán)節(jié)需要的微生物大多分布在　　　　　　　　　　　　　　的環(huán)境中。將從土壤中獲得的微生物培養(yǎng)在以　　　　　　　為唯一碳源,并加入　　　　　　　的培養(yǎng)基上,篩選周圍有　　　　　　　的菌落。 (2)在如上所述的篩選過程中獲得了三個菌落,對它們分別培養(yǎng),并完成環(huán)節(jié)②,且三種等量酶液中酶的濃度相同,則你認為三種酶液的活性　　　　　　　　　(填“一定相同”“不一定相同”或“一定不同”),可以通過　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　進行定量測定。 (3)根據(jù)測定結果,①環(huán)節(jié)常選擇木霉,則②中獲得的酶是　　　　　　　酶。 (4)生產中可以滿足④環(huán)節(jié)的常見菌種是　　　　　　,為了確保獲得產物乙醇,⑤環(huán)節(jié)要注意　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 答案(1)富含纖維素(其他答案合理也可,如落葉較多等)　纖維素　剛果紅　透明圈 (2)不一定相同　對纖維素酶分解纖維素后所產生的葡萄糖 (3)纖維素 (4)酵母菌　發(fā)酵裝置的密閉性(或保證無氧條件等) 解析 (1)富含纖維素的土壤中,含有大量以纖維素為碳源的纖維素分解菌。剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物,當纖維素分解后,復合物無法形成,培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈,通過此方法來篩選纖維素分解菌。(2)酶液中蛋白質的濃度相同,酶的活性不一定相同,可通過分解纖維素后所產生的葡萄糖量是否相等來鑒定其活性是否相同。(3)木霉能產生纖維素酶,可以將纖維素分解。(4)在酒精發(fā)酵中常用的微生物是酵母菌,在接種過程中一定要避免雜菌污染。乙醇是酵母菌無氧發(fā)酵的產物,發(fā)酵過程中一定要保持無氧的環(huán)境。