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體液中酶的生物化學檢驗,1,,1、掌握臨床診斷中常用酶與同工酶的檢測方法、參考區(qū)間及臨床意義,2、熟悉酶及同工酶的基本概念、分類與特征,本章教學要求：,2,第一節(jié) 概述,,3,一、基本概念,酶（E）：具有催化作用的生物大分子，在生命進程中發(fā)揮著重要作用。除少數(shù)酶是核酸外，絕大多數(shù)酶是蛋白質(zhì) 酶的底物（S）：酶所催化的反應物 酶的產(chǎn)物（P）：酶促反應的生成物 酶的活性：酶的催化能力的大小,4,二、酶的分類,單純酶 結(jié)合酶 酶蛋白（蛋白質(zhì)部分） 輔助因子,,輔酶（非共價鍵結(jié)合） 輔基（共價鍵結(jié)合）,,1、酶分子的組成,5,2、催化的反應性質(zhì),1.氧化還原酶 2.轉(zhuǎn)移酶 3.水解酶 4.裂合酶或裂解酶 5.異構(gòu)酶 6.合成酶或連接酶,酶的命名采用系統(tǒng)命名法,,6,7,三、同工酶,同工酶：催化的化學反應相同，但酶蛋白的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)乃至免疫學性質(zhì)不同的一組酶。 根據(jù)同工酶的來源和結(jié)構(gòu)不同，從基因角度可將其分為單基因決定的同工酶、復等位基因同工酶、多基因決定的同工酶和修飾同工酶四類。,8,9,四、血清酶,血漿特異酶（血漿固有酶）：凝血酶、纖溶酶、膽堿酯酶、銅氧化酶（銅藍蛋白）、脂蛋白酯酶等 非血漿特異酶：外分泌酶和細胞酶,（一）分類,10,（二）影響血清酶的因素,1、生理變化,性別 年齡 飲食 運動 妊娠,11,2、病理變化,（1）酶合成異常：大多數(shù)酶在肝臟合成 （2）酶釋放增加：酶從病變（或損傷）細胞中釋放增加是疾病時大多數(shù)酶增高的原因 （3）酶清除異常：同酶的半壽期以及其他一些因素有關,血清酶的半壽期（T1/2）：指酶失活至原來活性一半時所需要的時間。半壽期長的酶，在血清中持續(xù)時間長。,12,13,第二節(jié) 臨床診斷中常用的酶與同工酶,一、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）,也稱谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）一種參與人體蛋白質(zhì)新陳代謝的酶，起加快體內(nèi)蛋白質(zhì)氨基酸在體內(nèi)轉(zhuǎn)化的作用，它廣泛存在于人體各種組織、器官、肌肉、骨骼中，以肝細胞的細胞漿中最多。,14,（一）檢測方法,連續(xù)監(jiān)測法,可在340nm處連續(xù)監(jiān)測NADH的消耗量，從而計算出ALT活性濃度。,L-丙氨酸+α-酮戊二酸 α-丙酮酸+L-谷氨酸,ALT,α-丙酮酸+NADH+H+ 乳酸+NAD+,LD,15,（二）參考區(qū)間,男性：9--50U/L 女性：7--40U/L,（三）臨床意義,1、活性增高 （1）肝膽疾?。簜魅拘愿窝?、肝癌、中毒性肝炎、脂肪肝、膽管炎等 （2）心血管疾?。盒墓！⑿募⊙?、腦出血等 （3）藥物和毒物 2、活性降低：磷酸吡哆醛缺乏癥,16,二、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）,也稱谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT），AST和ALT是人體內(nèi)糖和蛋白質(zhì)相互轉(zhuǎn)變所需的酶。AST廣泛分布于全身各組織，尤其以心臟、骨骼肌、肝臟、腎臟中最為豐富，在細胞內(nèi)定位于線粒體（ASTm）和胞質(zhì)（ASTs）中，70%為ASTm,17,（一）檢測方法,連續(xù)監(jiān)測法,可在340nm處連續(xù)監(jiān)測NADH的消耗量，從而計算出AST活性濃度。,L-天冬氨酸+α-酮戊二酸 草酰乙酸+L-谷氨酸,AST,草酰乙酸+NADH+H+ L-蘋果酸+NAD+,MD,18,（二）參考區(qū)間,8--40U/L,（三）臨床意義,活性增高 （1）AST在心肌細胞中含量最高，心肌梗死時活性增高 （2）各種肝病 （3）肌炎、胸膜炎、腎炎、肺炎,19,三、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）,是一種含巰基的線粒體酶，參與體內(nèi)谷胱甘肽的代謝。腎臟、肝臟和胰腺中含量豐富，但血清中GGT主要來自肝膽系統(tǒng)。GGT在肝臟中廣泛分布于肝細胞的毛細膽管一側(cè)和整個膽管系統(tǒng)，因此肝內(nèi)合成亢進或膽汁排出受阻時，血清中GGT升高。,20,（一）檢測方法,堿性條件下GCNA與甘氨酰甘氨酸反應的方法,（二）參考區(qū)間,男性：11--50U/L 女性：7--32U/L,21,（三）臨床意義,1、腎臟疾病：血清中GGT活性升高不明顯 2、肝臟疾病： （1）診斷惡性腫瘤肝轉(zhuǎn)移和肝癌術后復發(fā)情況，陽性率可達90% （2）GGT同工酶II與AFP聯(lián)合檢測可原發(fā)性肝癌的檢測陽性率明顯升高 3、嗜酒或長期服用某種藥物,22,四、肌酸激酶（CK）,CK能催化高能磷酸鍵在肌酸和ATP之間轉(zhuǎn)換。為二聚體結(jié)構(gòu)，由M和B兩個亞基構(gòu)成，可組成三種同工酶，CK-MM（主要存在于骨骼肌中）、CK-BB（腦、平滑?。?、CK-MB（心肌）。,23,（一）檢測方法,酶偶聯(lián)法,（二）參考區(qū)間,男性：38--174U/L 女性：26--140U/L,24,（三）臨床意義,1、心肌梗死：AMI發(fā)生后4-8h，CK開始升高，12-48h達高峰，可達正常上限的10-12倍，2-4天后降至正常。CK-MB是目前公認的診斷AMI較有價值的生化指標。 2、病毒性心肌炎 3、皮肌炎、肌營養(yǎng)不良、骨骼肌損傷等 4、腦膜炎、腦血管意外、甲狀腺功能低下 5、非疾病因素：劇烈運動，各種插管及手術等,升高,甲亢、長期臥床者，CK-MM下降,25,五、乳酸脫氫酶（LD）,LD是參與糖無氧酵解和糖異生的重要酶。LD是由M和H兩個亞基組成的四聚體，形成五種結(jié)構(gòu)不同的同工酶 LD1（H4）和LD2（H3M）：主要存在于腎、心肌和紅細胞 LD3（H2M2）：脾臟、肺臟 LD4（HM3）和LD5（M4）：橫紋肌和肝臟,26,（一）檢測方法,連續(xù)監(jiān)測法,在340nm處連續(xù)監(jiān)測NADH吸光度上升或下降速率，與LD活性呈正比關系。,正向反應：L-乳酸+NAD 丙酮酸+ NADH+H+,LD,LD,逆向反應：丙酮酸+ NADH+H+ L-乳酸+NAD,PH8.8-9.8,PH7.4-7.8,27,（二）參考區(qū)間,LD-L法：109--245U/L LD-P法：200--280U/L,28,（三）臨床意義,29,六、堿性磷酸酶（ALP）,堿性磷酸酶（ALP或AKP）是廣泛分布于人體肝臟、骨骼、腸、腎和胎盤等組織經(jīng)肝臟向膽外排出的一種酶。這種酶能催化核酸分子脫掉5’磷酸基團，從而使DNA或RNA片段的5’-P末端轉(zhuǎn)換成5’-OH末端。但它不是單一的酶，而是一組同功酶。分為生殖細胞型、胎盤型、腸型和非特異組織型。,30,（一）檢測方法,連續(xù)監(jiān)測法,（二）參考區(qū)間,女性：1-12歲 15歲 40--150U/L 男性：1-12歲 25歲 40--150U/L,31,（三）臨床意義,1、骨骼疾?。鹤冃涡怨茄?、佝僂病、軟骨病、骨惡性腫瘤、惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移等 2、肝膽疾?。鹤枞渣S疸、肝硬化、肝壞死、原發(fā)性和繼發(fā)性肝癌時明顯升高；肝細胞性黃疸升高不明顯。 3、腫瘤：乳腺癌、肺癌等 4、其他疾?。杭谞钕偌凹谞钆韵俟δ芸哼M、遺傳性ALP過多癥 5、藥物：巴比妥類、抗生素等,升高,32,七、酸性磷酸酶（ACP）,酸性磷酸酶是一種在酸性條件下催化磷酸單酯水解生成無機磷酸的水解酶。人血清酸性磷酸酶的最適pH為4.5-7。ACP前列腺含量最多，主要存在于巨噬細胞，定位于溶酶體內(nèi)。ACP同工酶分為前列腺ACP和非前列腺ACP兩大類。,33,（一）檢測方法,連續(xù)監(jiān)測法,（二）參考區(qū)間,成人總酶活性：0--9U/L 前列腺ACP：0--3U/L,（三）臨床意義,血清中ACP測定主要作為前列腺癌的輔助診斷、療效觀察及預后判斷。,34,八、淀粉酶（AMY）,AMY屬于糖苷鏈水解酶。主要存在于胰腺和唾液腺中。有兩種同工酶，唾液型（S-AMY）和胰腺型（P-AMY）。正常人血清中AMY主要由肝臟產(chǎn)生，AMY分子量小，可通過腎小球濾過出現(xiàn)在尿液中。AMY是唯一能正常時出現(xiàn)于尿液中的血清酶。,35,（一）檢測方法,對硝基酚麥芽七糖苷法,（二）參考區(qū)間,血清AMY：220U/L 尿AMY :≤1200U/L,36,（三）臨床意義,1、急性胰腺炎和流行性腮腺炎。 急性胰腺炎發(fā)病后2h血AMY開始升高，12-24h達高峰，2-5天降至正常。尿AMY于發(fā)病后12-24h開始升高，下降也比血清慢。因此急性胰腺炎后期測定尿AMY意義更大。 2、急性闌尾炎、腸梗阻、胰腺癌、膽石癥、潰瘍病穿孔及嗎啡注射后 3、血清與尿中同時減低主要見于肝炎、肝硬化、肝癌及急慢性膽囊炎。,37,九、脂肪酶（LPS）,LPS又稱甘油三酯酶或甘油三酯酯酰水解酶，是分解脂肪的酶，催化脂肪水解為甘油和脂肪酸。血清LPS主要來源于胰腺，少數(shù)來自胃腸粘膜，可由腎小球濾過，并由腎小管全部重吸收，所以尿液中測不到脂肪酶活性。,38,（一）檢測方法,酶偶聯(lián)比色法,（二）參考區(qū)間,酶偶聯(lián)法：1--54U/L 比濁法 :0-7.9U/L,39,（三）臨床意義,1、主要用于急性胰腺炎的診斷，靈敏度高達80%-100%，特異性為84%-96%。診斷價值優(yōu)于AMY。 2、酗酒、乙醇性胰腺炎、胰腺癌、慢性胰腺炎以及肝膽疾病時有不同程度的升高。,40,十、膽堿酯酶（ChE）,ChE是一類催化?；憠A的水解酶。一般可分為真性膽堿酯酶（AChE）和假性膽堿脂酶（PChE）。真性膽堿酯酶也稱乙酰膽堿酯酶主要存在于膽堿能神經(jīng)末梢突觸間隙，PChE又稱血清膽堿酯酶。臨床上測定的ChE主要由肝細胞合成。另外，含有有機磷的殺蟲劑能抑制紅細胞內(nèi)的AChE和血清中的PChE。,41,（一）檢測方法,丁酰硫代膽堿法,（二）參考區(qū)間,5000--12000U/L,42,（三）臨床意義,1、有機磷和甲丙氨酯類殺蟲劑中毒時，血清ChE活性明顯降低，并與臨床癥狀相一致。 2、評價肝細胞合成功能的靈敏指標：各種慢性肝病，如肝炎、肝膿腫、肝硬化患者中，約有50%患者ChE活性降低。 3、羊水中AChE的測定可以用于神經(jīng)管缺陷的產(chǎn)前診斷。,43,,THE END,THANK YOU！！,44,