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第三章顯微鑒定的基本操作技能 1 第一節(jié)顯微標本片的制作 2 一 組織透化劑及應用 1 組織透化劑 使細胞組織內(nèi)含物溶解除去或透明清晰 色素氧化退色 皺縮細胞壁膨脹透明的試劑 2 作用 1 浸潤作用 2 溶解 分解或氧化作用 3 3 常見的透化劑 1 水合氯醛的特點 能滲入組織細胞內(nèi) 使干燥而皺縮的細胞發(fā)生膨脹 能溶解多數(shù)組織內(nèi)含物 對觀察草酸鈣結(jié)晶極為適宜 不加熱可立刻觀察菊糖 2 氫氧化鉀 氫氧化鈉 溶液的特點 1 5 水溶液為強力透化劑 能迅速溶解除去淀粉和蛋白質(zhì) 且能使細胞壁膨脹 作用持久 對纖維素性細胞壁組織有解離作用 透化后需將其洗去 常用于解離組織標本片 4 二 組織封藏劑及應用 1 組織封藏劑 能保持原制片要求 利于組織和細胞形狀 顏色和內(nèi)含物觀察的溶液 2 作用 保持原制片要求 3 常見的封藏劑 1 蒸餾水加酚 苯甲酸 樟腦等防霉 特點 能保持原形 原色 對皺縮的細胞壁可恢復原狀態(tài) 用蒸餾水裝片可觀察淀粉粒 可使黏液溶解 并破壞糊粉粒 5 2 稀甘油加入酚等防霉 特點 保持2 3天 用稀甘油裝片可觀察糊粉粒 淀粉粒 油滴 樹脂等 可在透化后滴加 以防水合氯醛析出結(jié)晶 6 三 顯微標本片 1 粉末標本片 以粉末裝片 粉末有細度要求 2 表面標本片 3 切片標本片 中藥鑒定中最多的一類 4 解離組織標本片 四 粉末標本裝片 1 暫時性粉末標本片 暫時性的 用完之后就洗掉的 載玻片 蓋玻片可重復使用 過程 1 粉末加封藏劑 蓋蓋玻片 清潔 觀察 7 2 粉末加水合氯醛溶液加熱透化三次 加稀甘油封藏 蓋蓋玻片 清潔 觀察 2 永久性粉末標本片 做法較復雜 一般我們在外面購買的就是永久性裝片 只要不損壞 可以一直看 8 五 表面標本片 主要用于葉片 萼片 花瓣和雄蕊等表皮的表面特征觀察 1 整體封藏法 取材料剪取正反2小片 加水合氯醛加熱透化3次 加稀甘油封藏 蓋蓋玻片 清潔 觀察 2 表皮撕離法 適用于較厚的葉片 萼片 花瓣等 9 六 切片制片法 此類與粉末裝片用得最多 有橫切和縱切 1 機器切片法 生活中很少用 只有生產(chǎn)廠家大量生產(chǎn)時運用 2 徒手切片法 實驗室常用此法 1 材料的預處理 清潔 除去非藥用部分 選取合適切片部分 切成適當大小的塊 軟化 10 軟化方法 在吸濕器中放置12 24h 過硬 水浸或煮12h 特硬 高壓鍋煮20min 如天麻 過軟 浸入高濃度乙醇中20min 11 軟化注意事項 需觀察糊粉粒 黏液 菊糖等水可溶性的物質(zhì)的 不可與水接觸 需觀察揮發(fā)油 樹脂等 不能與高濃度乙醇或其他有機溶劑接觸 12 2 材料的分割 切薄片 3 材料的挾持 方便切片 常用胡蘿卜 馬鈴薯 4 徒手切片刀 雙面和單面 雙面切較柔軟 單面切較硬 單面應用較多 13 5 持刀方法 右手持刀 刀身放平 刀口向切片者 6 切片 材料和刀口蘸水 切掉不整齊一段 同左前外方向右內(nèi)方迅速拉切 臂用力 7 取片 合乎需要的立即浸入水中 8 透化 置載玻片中央加水合氯醛加熱透化 9 封藏 加稀甘油封藏 蓋蓋玻片 10 清潔觀察 14 七 解離組織標本片 薄壁組織點大部分的用氫氧化鉀法 質(zhì)地堅硬 木化組織較多用硝鉻酸法 1 氫氧化鉀法 供試樣置試管中加氫氧化鉀 加熱 傾去堿液 用水洗 放于載玻片上 用解剖針撕開 加稀甘油 蓋上蓋玻片 15 2 供試樣置于試管中 加硝鉻酸試液適量 放置 傾去酸液 加水洗 放于載玻片上 用解剖針撕開 加稀甘油 蓋上蓋玻片 16 第二節(jié)顯微測量法 顯微測量 應用顯微鏡測量尺在顯微鏡下測量微細物體的大小 顯微測量尺分為目鏡測微尺和載物臺測微尺 1 目鏡測量尺 安裝在目鏡內(nèi)的一個測量尺 2 載物臺測量尺 載玻片中央粘貼的測量尺 17 3 兩尺的關(guān)系及應用 臺微尺是不變的 每小格10um 目微尺隨目鏡和物鏡的變化而變化 4 目微尺的標定 1 將臺微尺放置在載物臺上 目微尺放入目鏡鏡筒內(nèi) 2 先低倍鏡 將目微尺刻度移至視野中央 3 旋轉(zhuǎn)目鏡 使兩尺平行 18 4 移動臺微尺 使目微尺零端與臺微尺刻度的某刻度線相重合 5 再找兩尺的第二條重合刻度線 數(shù)兩條重合線間兩尺的小格數(shù) 記錄 6 計算出目微尺每一格在該物鏡條件下相當?shù)拈L度 um 標定值 臺微尺小格數(shù) 10um 目微尺小格數(shù) 19 5 測量方法 1 將需測量的載玻片放于載物臺上 2 用目微尺測量目的物的小格數(shù) 記錄 3 計算 實際長度um 測得小格數(shù) 標定值 20 第三節(jié)顯微繪圖法 顯微繪圖法的方法又分為平描和應用顯微描繪器描繪 一 平描 只憑肉眼描繪1 根據(jù)觀察到的實物進行繪圖 2 繪圖的要求 1 要排列整齊 部位適中 比例恰當 2 要做到形狀 比例 倍數(shù)正確 3 以點 線表示 21 4 圖中各部分用阿拉伯數(shù)字表示 在圖下端注明標號名稱 3 繪圖用具 16開白紙或A4白紙 鉛筆 22 4 繪圖 圖的類型一般分粉末圖及組織圖 1 粉末圖 繪出其粉末特征 2 組織詳圖 較詳細 需要所有組織全部繪出 較難 一般不繪此種圖 3 組織簡圖 以線條表示 清晰 一目了然 實驗室常繪出的圖 但不實用于出版 做研究等 二 顯微描繪器描繪 分放映裝置和描繪器 23 第四節(jié)常用顯微化學分析 一 細胞壁性質(zhì)的鑒別 1 木質(zhì)化細胞壁 加間苯三酚試液 放置 加鹽酸 顯紅色或紫紅色 2 木栓化或角質(zhì)化細胞壁 加蘇丹 試液或紫草試液 微熱 顯橘紅色至紫色 3 纖維素細胞壁 1 加氯化鋅碘試液濕潤 放置 再加硫酸溶液 顯藍色或紫色 4 硅質(zhì)化細胞壁 24 二 細胞內(nèi)含物質(zhì)性質(zhì)的鑒別 1 淀粉粒 1 加碘試液顯藍色或紫色 2 用甘油醋酸試液裝片 末糊化的在顯微鏡下顯偏光 2 菊糖 加a 萘酚乙醇溶液 再加硫酸 顯紫紅色并溶解 3 脂肪油 揮發(fā)油 樹脂 1 加蘇丹 試液或紫草試液 均顯橘紅色到紫紅色 25 2 加90 乙醇 脂肪油和樹脂不溶解 揮發(fā)油溶解 4 糊粉粒 1 加碘試液 顯棕色或黃棕色 2 加三硝基苯酚試液 顯黃色 3 加硝酸汞試液 顯磚紅色 5 黏液 1 加墨汁 黏液呈無色透明塊狀 2 加釕紅試液 顯紅色 26 6 草酸鈣結(jié)晶 1 加稀鹽酸溶解而無氣泡產(chǎn)生 2 加硫酸逐漸溶解 片刻后析出針狀硫酸鈣結(jié)晶 7 碳酸鈣結(jié)晶 加稀鹽酸溶解 有氣泡發(fā)生 8 硅質(zhì) 加硫酸不溶解 9 鞣質(zhì) 1 加三氯化鐵試液顯藍色或墨綠色 2 加鎢酸鈉試液產(chǎn)生黃棕色或紅棕色沉淀 27 1 顯微標本有哪些制法 布置練習 28 謝謝觀賞 29