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2019年高三生物二輪復(fù)習(xí) 專題8 生物技術(shù)實踐 一、選擇題(312＝36分) 1．下列有關(guān)微生物培養(yǎng)與應(yīng)用的說法正確的是(　　) A．天然培養(yǎng)基是指直接取自自然界不需加工的培養(yǎng)基 B．接種前需對培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實驗操作者的雙手等進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理 C．大腸桿菌的純化培養(yǎng)過程包括培養(yǎng)基的配制和純化大腸桿菌兩個階段 D．分離分解尿素的細(xì)菌時，尿素是培養(yǎng)基中唯一的氮源和碳源 [答案]　C [解析]　天然培養(yǎng)基是成分不明確的培養(yǎng)基，并不是不需加工配制的培養(yǎng)基；實驗者的雙手需進(jìn)行消毒處理；分離分解尿素的細(xì)菌時，尿素是唯一氮源而不是唯一的碳源。 2．加工橘子罐頭，采用酸堿處理脫去中果皮(橘絡(luò))，會產(chǎn)生嚴(yán)重污染。目前使用酶解法去除橘絡(luò)，可減少污染。下列生長在特定環(huán)境中的4類微生物，不能大量產(chǎn)生所用酶的有(　　) A．生長在麥麩上的黑曲霉 B．生長在酸奶中的乳酸菌 C．生長在棉籽殼上的平菇 D．生長在木屑上的木霉 [答案]　B [解析]　本題考查酶的專一性。橘絡(luò)的主要成分是纖維素，將其分解要用纖維素酶，麥麩、棉籽殼、木屑的主要成分也是纖維素，生長在這三種成分上的黑曲霉、平菇、木霉肯定能產(chǎn)生纖維素酶，所以可以利用。而乳酸菌的培養(yǎng)基為牛奶，其主要成分是蛋白質(zhì)，不含纖維素，所以乳酸菌不能產(chǎn)生纖維素酶。 3．下列有關(guān)培養(yǎng)基的配制原則，表述正確的是(　　) A．任何培養(yǎng)基都必須含有碳源、氮源、礦質(zhì)元素、生長因子 B．碳源和氮源必須具有一定比例，碳元素的含量最多，其次為氮元素 C．微生物的生長除受營養(yǎng)因素影響外，還受到pH、氧、滲透壓的影響 D．營養(yǎng)物質(zhì)的濃度越高越好 [答案]　C [解析]　不同的微生物需要的營養(yǎng)不同，如自生固氮菌能利用空氣中的N2為氮源，因而培養(yǎng)基中無需添加氮源；營養(yǎng)物質(zhì)濃度太高，會導(dǎo)致微生物失水。 4．下列有關(guān)提取和分離血紅蛋白的實驗敘述錯誤的是(　　) A．該實驗的材料必需選用雞血 B．通過透析法可以去除樣品中分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)，此為樣品的粗提取 C．凝膠色譜法是利用蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì) D．電泳法是利用各種分子帶電性質(zhì)的差異及分子的大小和形狀不同進(jìn)行分離 [答案]　A [解析]　因為雞血細(xì)胞中含有細(xì)胞核以及各種復(fù)雜的細(xì)胞器，會給提取血紅蛋白帶來一定的難度，故提取血紅蛋白一般選用哺乳動物的成熟紅細(xì)胞。 5．下列有關(guān)生物技術(shù)在實踐中的應(yīng)用的敘述，正確的是(　　) A．制葡萄醋的溫度要比制葡萄酒的溫度高些 B．使用加酶洗衣粉在任何條件下洗衣效果都比普通的洗衣粉好 C．凝膠色譜法是一種根據(jù)不同蛋白質(zhì)對光的吸收率不同而分離蛋白質(zhì)的有效方法 D．固定化細(xì)胞比固定化酶的催化效率高，適用于所有生產(chǎn)過程 [答案]　A [解析]　酵母菌酒精發(fā)酵的最適溫度為18～25℃，醋酸菌的最適溫度為30～35℃。加酶洗衣粉在酶催化的最適溫度時，洗衣效果最好，如果條件不適宜使酶變性失活或酶活性降低，則洗滌效果與普通洗衣粉相當(dāng)。凝膠色譜法是一種根據(jù)不同蛋白質(zhì)分子大小而分離蛋白質(zhì)的有效方法。 固定化細(xì)胞固定的是一系列酶，固定化酶固定的是一種酶，兩者適用于不同的生產(chǎn)過程。 6．某學(xué)生進(jìn)行“加酶洗衣粉和普通洗衣粉的洗滌效果”的課題研究。他的實驗設(shè)計如下： ①設(shè)置2組實驗，分別使用蛋白酶洗衣粉和復(fù)合酶洗衣粉 ②2組實驗的洗衣粉用量、被洗滌的衣物量、衣物質(zhì)地、污染物性質(zhì)和量、被污染的時間、洗滌時間、洗滌方式等全部設(shè)置相同 ③根據(jù)污漬去除程度得出結(jié)果 對這個實驗的評價，正確的是(　　) A．未設(shè)置對照實驗 B.無關(guān)變量設(shè)置太多 C．沒有自變量 D.因變量不能描述 [答案]　A [解析]　實驗課題是“加酶洗衣粉和普通洗衣粉的洗滌效果”，因此設(shè)置的2組實驗應(yīng)該是：一組用普通洗衣粉作對照組，另一組用加酶洗衣粉作實驗組。如果設(shè)置3組也正確，一組用普通洗衣粉作對照組，實驗組設(shè)置使用蛋白酶洗衣粉和復(fù)合酶洗衣粉。 7．(xx全國大綱，4)某同學(xué)在①、②、③三種條件下培養(yǎng)大腸桿菌，這三種條件是： ①以葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基，不斷補充培養(yǎng)基，及時去除代謝產(chǎn)物 ②以葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基，不斷補充培養(yǎng)基，不去除代謝產(chǎn)物 ③以葡萄糖和乳糖為碳源的培養(yǎng)基，不補充培養(yǎng)基，不去除代謝產(chǎn)物 根據(jù)培養(yǎng)結(jié)果繪制的一段時間內(nèi)菌體數(shù)的對數(shù)隨時間變化的趨勢如下圖： 假設(shè)三種培養(yǎng)基中初始總糖量相等，則①、②、③三種條件依次對應(yīng)的趨勢圖是(　　) A．甲、乙、丙 　　　　　 B．乙、丙、甲 C．丙、甲、乙 D．丙、乙、甲 [答案]　C [解析]?、僦械臈l件是營養(yǎng)物質(zhì)充足，又及時去除代謝產(chǎn)物，消除了代謝產(chǎn)物對種群的影響，種群的生長在一段時間呈“J”型增長，丙曲線符合這一變化趨勢；②中不補充營養(yǎng)物質(zhì)，不去除代謝產(chǎn)物，即環(huán)境條件影響種群的生長，種群會呈現(xiàn)“S”型生長，甲曲線符合這一變化趨勢；③中碳源為葡萄糖和乳糖，當(dāng)葡萄糖消耗完后，種群的生長受到一定的影響，但當(dāng)有些大腸桿菌能利用乳糖后，又呈現(xiàn)一段時間的增長，隨后到達(dá)K值，如果繼續(xù)維持這種生長環(huán)境，種群數(shù)量還可能在到達(dá)K值后下降，乙曲線符合這一變化趨勢。綜上所述，本題應(yīng)選B。 8．下列有關(guān)固定化酶和固定化細(xì)胞的敘述，正確的是 (　　) A．可用包埋法制備固定化酵母細(xì)胞 B．反應(yīng)產(chǎn)物對固定化酶的活性沒有影響 C．葡萄糖異構(gòu)酶固定前后專一性不同 D．固定化細(xì)胞可以催化各種反應(yīng)底物的一系列反應(yīng) [答案]　A [解析]　A項正確，酵母細(xì)胞體積大，適合用包埋法，酶體積小，適合用物理吸附法或化學(xué)結(jié)合法；B項錯誤，一些反應(yīng)產(chǎn)物可以與酶特異性結(jié)合，從而影響酶的活性；C項錯誤，酶固定前后專一性不變；D項錯誤，細(xì)胞內(nèi)酶種類有限，且酶具有專一性。 9．某同學(xué)進(jìn)行“加酶洗衣粉和普通洗衣粉的洗滌效果比較”課題研究。下列敘述錯誤的是(　　) A．設(shè)計對照實驗，分別使用蛋白酶洗衣粉和復(fù)合酶洗衣粉 B．洗衣粉用量、污漬種類和洗滌溫度等無關(guān)變量全部相同且適宜 C．根據(jù)相同時間內(nèi)污漬去除程度的差異得出實驗結(jié)論 D．根據(jù)污漬完全洗凈所需時間的差異得出實驗結(jié)論 [答案]　A [解析]　比較加酶洗衣粉和普通洗衣粉的洗滌效果，設(shè)計對照實驗時，應(yīng)該用加酶洗衣粉和普通洗衣粉進(jìn)行對照。 10．(xx淮安二模)下面是某同學(xué)用動物肝臟做“DNA粗提取與鑒定實驗”的操作，正確的是(　　) A．在燒杯中加入肝臟和蒸餾水并進(jìn)行攪拌，使細(xì)胞破裂釋放核物質(zhì) B．調(diào)節(jié)NaCl溶液濃度至0.14 mol/L，過濾后取濾液進(jìn)行后續(xù)步驟的操作 C．在含DNA的濾液中加入嫩肉粉，使蛋白質(zhì)與DNA分開 D．向溶有DNA的NaCl溶液中加入適量二苯胺試劑后溶液呈藍(lán)色 [答案]　C [解析]　因肝臟細(xì)胞沒有分散開，在燒杯中加入肝臟和蒸餾水并進(jìn)行攪拌，不能使細(xì)胞破裂，應(yīng)研磨；DNA在0.14 mol/L 的NaCl溶液中溶解度很低，過濾后DNA不在濾液中；嫩肉粉中有蛋白酶可使蛋白質(zhì)分解；向溶有DNA的NaCl溶液中加入適量二苯胺試劑后需加熱溶液才能呈藍(lán)色。 11．下列關(guān)于酶和細(xì)胞的固定化研究及應(yīng)用的敘述，正確的是 (　　) A．用海藻酸鈉固定酵母細(xì)胞的方法屬于物理吸附法 B．用化學(xué)結(jié)合法固定化酶不會對其活性產(chǎn)生影響 C．固定化酶和固定化細(xì)胞催化反應(yīng)的底物都可以是大分子 D．固定化酶和固定化細(xì)胞都可反復(fù)使用，催化反應(yīng)的速率會受環(huán)境影響 [答案]　D [解析]　用海藻酸鈉固定酵母細(xì)胞的方法屬于包埋法；用化學(xué)結(jié)合法固定化酶是將酶通過化學(xué)鍵連接到天然的或合成的高分子載體上，使用偶聯(lián)劑通過酶表面的基團(tuán)將酶交聯(lián)起來，因而可能會對其活性產(chǎn)生影響；固定化細(xì)胞催化的反應(yīng)一般是利用細(xì)胞內(nèi)的一系列酶催化一系列的化學(xué)反應(yīng)，這些反應(yīng)一般在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，大分子物質(zhì)不易進(jìn)入細(xì)胞，因此不適合催化大分子底物；固定化酶和固定化細(xì)胞都能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離，因而可反復(fù)使用，但環(huán)境因素會影響酶的活性和細(xì)胞的生命活動。 12．下列關(guān)于腐乳制作的敘述中，錯誤的是 (　　) A．毛霉可利用蛋白酶將蛋白質(zhì)分解成小分子肽和氨基酸 B．豆腐坯表面有毛霉、青霉、曲霉等微生物，它們之間存在競爭關(guān)系 C．腐乳的前期制作溫度應(yīng)控制在15～18℃環(huán)境條件下 D．加入較多的香辛料既能調(diào)味又能縮短腐乳成熟的時間 [答案]　D [解析]　制作腐乳主要是利用毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶和脂肪酶將豆腐內(nèi)的蛋白質(zhì)分解成小分子肽和氨基酸，脂肪分解成甘油和脂肪酸，從而改變豆腐的成分和口味；豆腐坯表面長有毛霉、青霉、曲霉等微生物，它們都利用豆腐內(nèi)的營養(yǎng)來維持生命活動，因而存在競爭關(guān)系；毛霉生長的適宜溫度是15～18℃；加入較多的香辛料能調(diào)味，殺菌防腐，酒精含量越高，對蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延長。 二、非選擇題(64分) 13．(10分)(xx山東，35)玉米是重要的糧食作物，經(jīng)深加工可生產(chǎn)酒精、玉米胚芽油和果糖等。流程如下： (1)玉米秸稈中的纖維素經(jīng)充分水解后的產(chǎn)物可被酵母菌利用發(fā)酵生產(chǎn)酒精。培養(yǎng)酵母菌時，該水解產(chǎn)物為酵母菌的生長提供________。發(fā)酵過程中檢測酵母菌數(shù)量可采用________法或稀釋涂布平板法計數(shù)。 (2)玉米胚芽油不易揮發(fā)，宜選用________法或________法從玉米胚芽中提取。 (3)玉米淀粉經(jīng)酶解形成的葡萄糖可在葡萄糖異構(gòu)酶的作用下轉(zhuǎn)化成果糖。利用________技術(shù)可使葡萄糖異構(gòu)酶重復(fù)利用，從而降低生產(chǎn)成本。 (4)利用PCR技術(shù)擴增葡萄糖異構(gòu)酶基因時，需用耐高溫的________催化。PCR一般要經(jīng)歷三十次以上的循環(huán)，每次循環(huán)包括變性、________和________三步。 [答案]　(1)碳源　顯微鏡直接計數(shù) (2)壓榨　萃取(注：兩空可顛倒) (3)固定化酶 (4)(Taq)DNA聚合酶　(低溫)復(fù)性(或退火)　(中溫)延伸 [解析]　(1)培養(yǎng)酵母菌時，玉米秸稈中纖維素的水解產(chǎn)物能為酵母菌的生長提供碳源。檢測酵母菌數(shù)量可采用顯微鏡直接計數(shù)法或稀釋涂布平板法計數(shù)。 (2)玉米胚芽油不易揮發(fā)，宜選用壓榨法或萃取法從玉米胚芽中提取。 (3)利用固定化酶技術(shù)可使葡萄糖異構(gòu)酶重復(fù)利用，從而提高酶的利用率，降低生產(chǎn)成本。 (4)利用PCR技術(shù)擴增葡萄糖異構(gòu)酶基因時，需用耐高溫的(Taq)DNA聚合酶催化。PCR一般要經(jīng)歷三十次以上的循環(huán)，每次循環(huán)包括變性、(低溫)復(fù)性(或退火)；(中溫)延伸三步。 14．(11分)(xx江蘇，30)為了獲得β－胡蘿卜素產(chǎn)品，某小組開展了產(chǎn)β－胡蘿卜素酵母的篩選與色素提取實驗。 請回答下列問題： (1)實驗用的培養(yǎng)皿常用的兩種滅菌方法是__________；為了減少滅菌后器皿被污染，滅菌前應(yīng)該____________。 (2)為了篩選出酵母菌，培養(yǎng)基中添加了青霉素，其目的是____________________。 (3)右圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖，圖中甲、乙、丙指示的依次是________。 (填序號) ①安全閥、放氣閥、壓力表 ②放氣閥、安全閥、壓力表 ③安全閥、放氣閥、溫度表 ④放氣閥、安全閥、溫度表 (4)為了將分離到的菌株純化，挑取了菌落在3塊相同平板上劃線，結(jié)果其中一塊平板的各劃線區(qū)均未見菌生長，最可能的原因是________________________。 (5)為增加β－胡蘿卜素提取量，在研磨酵母細(xì)胞時，添加石英砂的目的是___________；研磨時________(填“需要”或“不需要”)添加CaCO3，理由是_____________。 [答案]　(1)干熱滅菌和濕熱滅菌(高壓蒸汽滅菌) 用牛皮紙(報紙)包扎器皿 (2)抑制細(xì)菌(放線菌)生長 (3)①　 (4)接種環(huán)溫度過高，菌被殺死 (5)有助于研磨充分　不需要　β－胡蘿卜素較耐酸 [解析]　(1)對玻璃器皿常用的滅菌方法是干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌(濕熱滅菌)法；用牛皮紙包扎玻璃器皿可有效防止滅菌后的物品被環(huán)境中雜菌污染。 (2)青霉素是一種廣譜抗生素，通過抑制肽聚糖的形成而抑制細(xì)胞壁的形成從而抑制細(xì)菌(放線菌)的繁殖、生長。酵母菌是真菌，其細(xì)胞壁的成分是幾丁質(zhì)，添加青霉素的培養(yǎng)基對酵母菌的繁殖沒有影響，從而篩選出酵母菌。 (3)圖示中的甲為安全閥，乙為放氣閥，丙為氣壓表。 (4)在將分離得到的菌株純化，一般采用劃線法和涂布平板法，在應(yīng)用劃線法取菌種時，應(yīng)先將接種環(huán)灼燒滅菌，冷卻后再提取菌種，否則會因接種環(huán)溫度過高而將菌種殺死，使實驗失敗。 (5)在提取胡蘿卜素是，研磨時添加石英砂，是為了使細(xì)胞研磨充分，胡蘿卜素充分釋放；研磨時，不需要添加CaCO3，因為β一胡蘿卜素較耐酸性環(huán)境，不需要加入CaCO3來保護(hù)胡蘿卜素結(jié)構(gòu)不被破壞。 15．(10分)(xx海南，30)已知泡菜中亞硝酸鹽含量與泡制時間有關(guān)。為了測定不同泡制天數(shù)泡菜中亞硝酸鹽的含量，某同學(xué)設(shè)計了一個實驗，實驗材料、試劑及用具包括：刻度移液管、比色管、不同濃度的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液、亞硝酸鹽的顯色劑、不同泡制天數(shù)的泡菜濾液等。 回答相關(guān)問題： (1)請完善下列實驗步驟： ①標(biāo)準(zhǔn)管的制備：用________和顯色劑制成顏色深淺不同的系列標(biāo)準(zhǔn)管。 ②樣品管的制備：用刻度移液管分別吸取一定量的________，加到不同的比色管中，然后在各個比色管中加入等量的顯色劑進(jìn)行顯色，得到樣品管。 ③將每個________分別與系列標(biāo)準(zhǔn)管進(jìn)行比較，找出與樣品管顏色深淺________的標(biāo)準(zhǔn)管，該管中亞硝酸鈉含量即代表樣品管中亞硝酸鹽含量，記錄各樣品管亞硝酸鹽的含量。 (2)下圖表示的是泡菜中________趨勢。 (3)泡菜制作過程中產(chǎn)酸的細(xì)菌主要是________(填“醋酸桿菌”或“乳酸菌”)。 [答案]　(1)①亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 ②不同泡制天數(shù)的泡菜濾液 ③樣品管　最相近(其他合理答案也給分) (2)亞硝酸鹽含量隨泡制時間的變化趨勢(其他合理答案也給分) (3)乳酸菌 [解析]　(1)亞硝酸鹽可與顯色劑發(fā)生顏色反應(yīng)，根據(jù)顏色的深淺可確定亞硝酸鹽的含量多少。用不同濃度的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液與顯色劑可制成顏色深淺不同的系列標(biāo)準(zhǔn)管，不同顏色深淺對應(yīng)的亞硝酸鈉濃度是已知的；用不同泡制天數(shù)的泡菜濾液與顯色劑反應(yīng)，制備一系列的樣品管，將樣品管的顏色與標(biāo)準(zhǔn)管進(jìn)行顏色比對，找到與樣品管顏色深淺最接近的標(biāo)準(zhǔn)管，所對應(yīng)的亞硝酸鈉濃度即可代表樣品管中的亞硝酸鹽含量。 (2)圖示曲線橫軸為時間，縱軸為亞硝酸鹽含量，該曲線表示泡菜中亞硝酸鹽含量隨發(fā)酵時間的變化趨勢。 (3)泡菜制作的原理是乳酸發(fā)酵，產(chǎn)酸的細(xì)菌主要是乳酸菌。 16．(11分)(xx新課標(biāo)Ⅰ，39)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝袉栴}： (1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將________分解成________。 (2)在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時，CR可與纖維素形成________色復(fù)合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的________。 (3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成分見下表)： 酵母膏 無機鹽 淀粉 纖維 素粉 瓊脂 CR溶液 水 培養(yǎng)基甲 ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ 培養(yǎng)基乙 ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ 注：“＋”表示有，“－”表示無。 據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是____________________；培養(yǎng)基乙________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是__________________________________。 [答案]　(1)纖維二糖　葡萄糖　(2)紅　透明圈 (3)不能　液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落　不能　培養(yǎng)基中沒有纖維素，不會形成CR－纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌。 [解析]　(1)纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是含量最豐富的多糖類物質(zhì)，能被土壤中某些微生物分解利用；分解纖維素的纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即CX酶、C1酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。(2)剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。(3)根據(jù)有無瓊脂成分，可推知，培養(yǎng)基甲為液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基乙為固體培養(yǎng)基；纖維素分解菌分離和鑒別要用固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基甲不符合要求；培養(yǎng)基乙不含纖維素粉，不能形成特定的紅色復(fù)合物，乙培養(yǎng)基不符合要求。 17．(11分)(xx山東實驗中學(xué)二模) 目前，現(xiàn)代生物技術(shù)已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于工業(yè)、農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥、環(huán)保等眾多領(lǐng)域，產(chǎn)生了巨大的經(jīng)濟(jì)和社會效益。請回答下列生物技術(shù)方面的問題： (1)利用乳酸菌制作泡菜時，往往會加入陳的“泡菜水”，作用是________，若泡菜特別咸而不酸，最可能的原因是______________________________。 (2)微生物培養(yǎng)過程中，獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是________，其中對培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌常用的方法是________________________。 (3)柑橘組織培養(yǎng)的操作程序是①________；②________；③接種；④培養(yǎng)；⑤移栽；⑥栽培。柑橘皮可以用提取橘皮精油，橘皮在________中的浸泡時間為10h以上，并且橘皮要浸透，這樣才會得到高的出油率。 (4)PCR技術(shù)是DNA循環(huán)復(fù)制的過程，每次循環(huán)可以分為________三步。 [答案]　(1)提供乳酸菌菌種(接種)　鹽過多，抑制了乳酸菌發(fā)酵 (2)防止外來雜菌的污染(無菌技術(shù))　干熱滅菌法 (3)制備MS固體培養(yǎng)基　外植體消毒　石灰水 (4)變性、復(fù)性、延伸 [解析]　“泡菜水”中有乳酸菌，可為制作泡菜提供所需的乳酸菌；若鹽過多，抑制了乳酸菌發(fā)酵可導(dǎo)致泡菜特別咸而不酸；微生物培養(yǎng)過程中，獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的污染，對培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌常用的方法是干熱滅菌法；植物組織培養(yǎng)一般要先制備MS固體培養(yǎng)基，然后對外植體消毒，然后才能接種等；橘皮在石灰水中浸泡10 h以上，才會得到高出油率；PCR技術(shù)每次循環(huán)經(jīng)變性、復(fù)性、延伸三步。 18．(11分)(xx湖南師范大學(xué)附中二模)人和哺乳動物的尿中含有尿素，大量尿素的存在會對環(huán)境造成污染。土壤中有些細(xì)菌含有脲酶，可通過降解尿素作為其生長的氮源?，F(xiàn)對土壤中的這類細(xì)菌進(jìn)行分離實驗，請回答下列問題： (1)分離培養(yǎng)細(xì)菌時必須進(jìn)行無菌操作，包括____________和各種器皿都必須是無菌的，常用的滅菌方法有__________________(答2種)。 (2)采用________法將樣液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后接種培養(yǎng)。在稀釋土壤溶液的過程中每一步都要在________旁進(jìn)行操作。接種后的培養(yǎng)皿________于37℃的恒溫箱中培養(yǎng)。 (3)用________培養(yǎng)基篩選能分泌脲酶的細(xì)菌，從功能上劃分該培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。若培養(yǎng)基中存在有脲酶的細(xì)菌，其菌落周圍會出現(xiàn)________，這是由于尿素被分解產(chǎn)生________，遇培養(yǎng)基中加入的酚紅指示劑產(chǎn)生的顏色變化，從而證明這一菌株可以尿素為氮源。變色區(qū)域越大，表明該菌株利用尿素的能力________。 (4)與全營養(yǎng)培養(yǎng)基中的菌落相比，以尿素為氮源的培養(yǎng)基中的菌落數(shù)________。 A．多 B．少 C．相等 D．幾乎為零 [答案]　(1)培養(yǎng)基　灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌(答出其中二項即可) (2)稀釋涂布平板法　酒精燈火焰　倒置 (3)以尿素為唯一氮源　選擇　紅色環(huán)帶　氨　越強 (4)B