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ICS 11.220B 41DB 37山 東 省 地 方 標 準DB 37/T XXXXX—XXXX恩諾沙星注射液中乙酰甲喹、水楊酸的測定－高效液相色譜法Determination maquindox and salicylic acid in enrofloxacin injection by high performance liquid chromatographyXXXX - XX - XX 發(fā)布 XXXX - XX - XX 實施山 東 省 市 場 監(jiān) 督 管 理 局 發(fā) 布DB37/ XXXXX—XXXXI目 次前言 II1 范圍 .12 規(guī)范性引用文件 .13 原理 .14 試劑或材料 .15 儀器設備 .16 測定步驟 .16.1 供試品溶液的制備 .26.2 對照品溶液的制備 .26.3 儀器參考條件 .26.4 測定 .27 試驗數(shù)據(jù)處理 .28 檢測方法的靈敏度、準確度和精密度 .39 圖譜 .3DB37/ XXXXX—XXXXII前 言本標準按照GB/T 1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標準由山東省市場監(jiān)督管理局提出并監(jiān)督實施。本標準由山東省畜牧業(yè)標準化技術(shù)委員會歸口。本標準起草單位：山東省獸藥質(zhì)量檢驗所。本標準主要起草人：李有志、薄永恒、馮濤、陳玲、徐紅瑋、張琦、劉霄飛、劉道中。DB37/ XXXXX—XXXX1恩諾沙星注射液中乙酰甲喹、水楊酸的測定－高效液相色譜法1 范圍本標準規(guī)定了恩諾沙星注射液中乙酰甲喹、水楊酸的高效液相色譜測定方法。本標準適用于恩諾沙星注射液中乙酰甲喹、水楊酸的測定。本方法乙酰甲喹檢出限為0.25 mg/mL、水楊酸檢出限為0.5 mg/mL。2 規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3 原理恩諾沙星注射液中乙酰甲喹、水楊酸經(jīng)稀釋后用高效液相色譜分離，二極管陣列檢測器檢測，保留時間和紫外光譜對照定性，外標法定量。4 試劑或材料除非另有規(guī)定，所用試劑均為分析純；水符合GB/T 6682一級水的規(guī)定。4.1 乙腈（C 2H3N）：色譜純。4.2 三乙胺（C 6H15N）：優(yōu)級純。4.3 甲醇（CH 3OH）：色譜純。4.4 磷酸（H 3PO4）：含量≥85 %。4.5 乙酰甲喹（C 11H10N2O3）、水楊酸（C 7H6O3）對照品：純度≥98 %。4.6 0.025 mol/L 磷酸溶液：量取磷酸溶液（4.4）1.70 mL（準確至 0.01 mL），置 1 000 mL 容量瓶中，加水 900 mL，用三乙胺調(diào)節(jié) pH 值至 3.0，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻。4.7 流動相（0.025 mol/L 磷酸溶液+乙腈=85+15）：取 0.025 moL/L 磷酸溶液 850 mL（4.6）加入乙腈（4.1）150 mL，搖勻，過 0.22 μm 有機微孔濾膜?，F(xiàn)用現(xiàn)配。4.8 有機微孔濾膜：0.22 μm。5 儀器設備5.1 高效液相色譜儀，配二極管陣列檢測器。5.2 分析天平：感量 0.000 01 g。6 測定步驟DB37/ XXXXX—XXXX26.1 供試品溶液的制備量取恩諾沙星注射液1.0 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇（4.3）稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置50 mL容量瓶中，用流動相（4.7）稀釋至刻度，搖勻，即得。6.2 對照品溶液的制備稱乙酰甲喹、水楊酸對照品（4.5）50 mg（準確至0.01 mg），置50 mL容量瓶中，加甲醇（4.3）稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL置100 mL容量瓶中，用流動相（4.7）稀釋至刻度，搖勻，即得，4 ℃保存。 6.3 儀器參考條件6.3.1 高效液相色譜參考條件色譜柱：C 18色譜柱，4.6 mm×250 mm，5 μm，或性能相當者；流動相：0.025 mol/L磷酸溶液+乙腈=85+15（4.7）；流速：1.0 mL/min；進樣量：10 μL；柱溫：25 ℃。6.3.2 二極管陣列檢測器參考條件定性采集波長范圍：200 nm～400 nm；定量波長：232 nm。6.4 測定6.4.1 定性測定通過樣品溶液色譜圖的保留時間與相應對照品溶液的保留時間以及色譜峰的紫外光譜相對照定性。樣品溶液與對照品溶液保留時間的相對偏差不大于2.5 %；樣品溶液色譜峰的紫外光譜與對照溶液色譜峰的紫外光譜一致，則可判斷樣品中存在乙酰甲喹、水楊酸。6.4.2 定量測定取供試品溶液和對照品溶液各10 μL注入液相色譜儀，在上述色譜條件下進行測定，記錄232 nm波長處的色譜圖，外標法定量。7 試驗數(shù)據(jù)處理供試品溶液中乙酰甲喹或水楊酸濃度按（1）進行計算：.(1)=SXXCA?式中：CX ──供試品溶液中乙酰甲喹或水楊酸濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；CS ──對照品溶液中乙酰甲喹或水楊酸濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；AX ──供試品溶液中乙酰甲喹或水楊酸峰面積；AS ──對照品溶液中乙酰甲喹或水楊酸面積。DB37/ XXXXX—XXXX3試樣中乙酰甲喹或水楊酸的含量按（2）進行計算：.(2)50=1XCV?式中：X ──試樣中乙酰甲喹或水楊酸的含量，單位為毫克每毫升（mg/mL）；CX ──供試品溶液中乙酰甲喹或水楊酸濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；V ──供試品取樣量，單位為毫升（mL）。測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。8 檢測方法的靈敏度、準確度和精密度本方法乙酰甲喹檢出限為0.25 mg/mL、水楊酸檢出限為0.5 mg/mL，回收率在95 %～105 %之間，在重復性條件下兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的5 %。9 圖譜恩諾沙星注射液中添加乙酰甲喹（20 μg/mL）、水楊酸（10 μg/mL）的液相色譜圖見圖1。 乙 -7.3568. 乙 -16.37AU0.1.203.450.67 乙.501.2.503.40.5.06.570.8.509.10.51.02.5130.41.50.160.571.08.5190.2圖 1 恩諾沙星注射液中添加乙酰甲喹（20 μg/mL）、水楊酸（10 μg/mL）的液相色譜圖恩諾沙星注射液空白色譜圖見圖2。 8.73AU0.1.203.450.67 乙.501.2.503.40.5.06.570.8.509.10.51.02.5130.41.50.160.571.08.5190.2圖 2 恩諾沙星注射液空白色譜圖_________________________________