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課后定時(shí)檢測(cè)案38　微生物的培養(yǎng)和利用 基礎(chǔ)對(duì)點(diǎn)練——考綱對(duì)點(diǎn)夯基礎(chǔ) 考點(diǎn)一　微生物的分離和培養(yǎng) 1．不同的微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需要各不相同。下列有關(guān)一種以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物營(yíng)養(yǎng)的描述，不正確的是(　　) A．氮源物質(zhì)為該微生物提供必要的氮素 B．碳源物質(zhì)也是該微生物的能源物質(zhì) C．無(wú)機(jī)鹽是該微生物不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) D．水是該微生物的營(yíng)養(yǎng)要素之一 解析：碳源分為有機(jī)碳源和無(wú)機(jī)碳源。當(dāng)有機(jī)物作為碳源時(shí)，既是碳源，又可作為能源；當(dāng)無(wú)機(jī)物作為碳源時(shí)，只能作為碳源，不能作為能源。該碳源是二氧化碳，屬于無(wú)機(jī)物，不能作為微生物的能源物質(zhì)。 答案：B 2．下列關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述錯(cuò)誤的是(　　) A．操作順序?yàn)橛?jì)算→稱量→溶化→倒平板→滅菌 B．將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯 C．待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右時(shí)倒平板 D．待平板冷卻凝固后將平板倒過(guò)來(lái)放置 解析：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是計(jì)算→稱量→溶化→滅菌→倒平板，其順序不能顛倒。牛肉膏容易吸潮，所以稱好后需將稱量紙一同放入燒杯，當(dāng)牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻璃棒取出稱量紙。待培養(yǎng)基冷卻到50 ℃左右，用手觸摸錐形瓶剛剛不燙手，并且培養(yǎng)基處于溶化狀態(tài)時(shí)開(kāi)始倒平板，平板冷卻凝固后才能倒置。 答案：A 3．細(xì)菌培養(yǎng)過(guò)程中分別采用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理，這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌(　　) A．接種環(huán)、手、培養(yǎng)基　　　　　B．高壓鍋、手、接種環(huán) C．培養(yǎng)基、手、接種環(huán) D．接種環(huán)、手、高壓鍋 解析：一般說(shuō)來(lái)滅菌是指徹底殺滅微生物使其永遠(yuǎn)喪失生長(zhǎng)繁殖的能力，對(duì)于培養(yǎng)基、操作器皿和接種環(huán)等都需要滅菌。消毒僅指殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的病原菌而對(duì)被消毒的物體基本無(wú)害，如操作者的手和衣著需要消毒處理。高壓蒸汽通常用于培養(yǎng)基的滅菌。用酒精擦拭雙手是消毒的一種方法。火焰灼燒，可以迅速?gòu)氐椎販缇?，適用于微生物的接種工具，如接種環(huán)。 答案：C 考點(diǎn)二　某種微生物數(shù)量的測(cè)定 4．能夠測(cè)定樣品活菌數(shù)的方法是(　　) A．稀釋涂布平板法　　　　B．直接計(jì)數(shù)法 C．質(zhì)量法 D．比濁法 解析：直接計(jì)數(shù)法是利用特定的計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積量樣品中微生物的數(shù)量，不能區(qū)分死菌與活菌；質(zhì)量法是用于微生物生長(zhǎng)測(cè)定的一種方法，有濕重法和干重法，也可以通過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)和DNA含量反映細(xì)胞的物質(zhì)質(zhì)量；比濁法是在一定范圍內(nèi)，懸液中細(xì)胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌越多，光密度越大；活菌在適宜培養(yǎng)基和良好生長(zhǎng)條件下通過(guò)生長(zhǎng)形成菌落，此法又稱活菌計(jì)數(shù)法，可采用稀釋涂布平板法接種。 答案：A 考點(diǎn)三　培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用 5．通過(guò)選擇培養(yǎng)基可以從混雜的微生物群體中分離出所需的微生物。在缺乏氮源的培養(yǎng)基上大部分微生物無(wú)法生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌的生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中加入10%的酚可以抑制細(xì)菌和霉菌的生長(zhǎng)。利用上述方法能從混雜的微生物群體中分別分離出(　　) ①大腸桿菌?、诿咕、鄯啪€菌?、芄痰?xì)菌 A．④②③ B．①②③ C．①③④ D．只有③④ 解析：缺乏氮源的培養(yǎng)基上大部分微生物無(wú)法生長(zhǎng)，而固氮細(xì)菌能生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中加青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌等原核生物細(xì)胞壁的合成，而霉菌屬于真核生物，故能生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中加入10%的酚可以抑制細(xì)菌和霉菌的生長(zhǎng)，對(duì)放線菌的生長(zhǎng)無(wú)影響。 答案：A 大題沖關(guān)練——綜合創(chuàng)新求突破 6．[2019安徽合肥高三質(zhì)量檢測(cè)]依據(jù)所學(xué)生物技術(shù)知識(shí)，分析回答下列問(wèn)題： (1)日常生活中烹飪產(chǎn)生的油煙冷卻后形成液態(tài)的油脂，工業(yè)生產(chǎn)中提取玫瑰精油的原理與之相同，該提取方法的名稱是__________________。 (2)為解決生活污水中油脂對(duì)環(huán)境造成的污染。科研人員要從污水中篩選出分解油脂能力最強(qiáng)的微生物。請(qǐng)分析回答： ①圖甲和圖乙所代表的方法中能對(duì)微生物進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)的是______________法。用該方法統(tǒng)計(jì)樣本菌落數(shù)時(shí)______________(“需要”或“不需要”)設(shè)置空白對(duì)照組，原因是__________________________。 ②圖乙中涂布前需對(duì)涂布器進(jìn)行的操作是________________________。 ③對(duì)分離油脂分解菌的選擇培養(yǎng)基成分的特別要求是__________________。 ④接種后，需要將培養(yǎng)細(xì)菌的固體培養(yǎng)基倒置培養(yǎng)的原因是________________________________________________________________________。 解析：(1)玫瑰精油的性質(zhì)穩(wěn)定，難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑，能隨水蒸氣一同蒸餾，因此提取玫瑰精油的方法是水蒸氣蒸餾法，其原理是利用水蒸氣將揮發(fā)性強(qiáng)的植物油攜帶出來(lái)。(2)①根據(jù)以上分析可知，可以對(duì)微生物進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)的接種方法是稀釋涂布平板法，即圖乙所示方法；稀釋涂布平板法中，為了判斷培養(yǎng)基是否被污染，需要設(shè)置空白對(duì)照組。②在稀釋涂布平板法中，對(duì)于涂布器需要用酒精浸泡，然后在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8～10秒。③油脂分解菌具有分解油脂的能力，而其他微 生物沒(méi)有，因此在培養(yǎng)基中加入油脂作為唯一碳源可以將油脂分解菌分離出來(lái)。④接種后將培養(yǎng)細(xì)菌的固體培養(yǎng)基倒置培養(yǎng)，可以避免培養(yǎng)皿蓋上的水珠滴入培養(yǎng)基，造成污染。 答案：(1)水蒸氣蒸餾法 (2)①稀釋涂布平板　需要　因?yàn)樾枰袛嗯囵B(yǎng)基是否被污染?、谟镁凭?，在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8～10秒?、垡杂椭瑸槲ㄒ惶荚础、鼙苊馀囵B(yǎng)皿蓋上的水珠滴入培養(yǎng)基，造成污染 7．[2019重慶高三診斷]北方每年在小麥豐收的季節(jié)，焚燒秸稈火焰四起，煙霧彌漫，不但導(dǎo)致嚴(yán)重的霧霾而且造成資源的浪費(fèi)?？茖W(xué)家為了解決這個(gè)問(wèn)題，努力尋找分解秸稈中纖維素的微生物，他們做了如下實(shí)驗(yàn)，據(jù)圖回答： (1)根據(jù)甲圖，選擇培養(yǎng)纖維素分解菌要用____________。為了鑒別纖維素分解菌，常在培養(yǎng)基中加入________。為了統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，常用方法除稀釋涂布平板法外，還有________的方法。 (2)乙圖是培養(yǎng)出的單菌落示意圖，最適合分解秸稈的兩個(gè)菌落是________(填數(shù)字)，纖維素分解菌將纖維素最終分解為_(kāi)_______________。從圖中可以看出培養(yǎng)基上菌落數(shù)較少，推測(cè)可能的原因是______________________________。 (3)為了長(zhǎng)期保存該微生物，可以采用______________的方法。 解析：(1)從土壤樣液中篩選能分解纖維素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基是選擇培養(yǎng)基。在培養(yǎng)基中加入剛果紅，剛果紅會(huì)與纖維素形成紅色復(fù)合物，而呈現(xiàn)紅色，如果纖維素被降解，則培養(yǎng)基表面會(huì)形成以纖維素分解菌為中心的透明圈 ，可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，常用稀釋涂布平板法或顯微鏡直接計(jì)數(shù)。 (2)透明圈的大小反映了細(xì)菌分解纖維素能力大小，培養(yǎng)基中大的透明圈就是分解纖維素多的地方，所以乙圖中最適合分解秸稈的兩個(gè)菌落是1和4；纖維素是多糖，最終被分解菌分解成葡萄糖；從圖中可以看出培養(yǎng)基上菌落數(shù)較少，推測(cè)可能是土壤中纖維素分解菌較少，稀釋的倍數(shù)太大所致。(3)長(zhǎng)期保留菌種可用甘油管藏的方法。 答案：(1)選擇培養(yǎng)基　剛果紅(CR)　顯微鏡直接計(jì)數(shù) (2)1和4　葡萄糖　土壤中纖維素分解菌較少，稀釋的倍數(shù)太大 (3)甘油管藏 8．日前微博傳言手機(jī)細(xì)菌比馬桶按鈕多。如圖，央視和北京衛(wèi)視通過(guò)實(shí)驗(yàn)展示調(diào)查結(jié)果。回答下列相關(guān)問(wèn)題： (1)該實(shí)驗(yàn)需制備培養(yǎng)基，培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、________。 (2)據(jù)圖，兩電視臺(tái)均采用________法接種，該方法需要________(多選)。 A．接種環(huán) B．酒精燈 C．移液管 D．涂布器 E．無(wú)菌水 (3)通過(guò)觀察菌落的________________，可知手機(jī)屏幕和馬桶按鈕都存在多種微生物。兩電視臺(tái)實(shí)驗(yàn)操作均正確且完全一致，但報(bào)道結(jié)果截然不同，你認(rèn)為原因是：____________________。 (4)按圖操作取樣面積，實(shí)驗(yàn)員測(cè)定某手機(jī)屏幕的細(xì)菌數(shù)量，將10 mL菌懸液進(jìn)行梯度稀釋，分別取0.1 mL稀釋倍數(shù)為102的樣品液接種到三個(gè)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)分別為48、50、52，則該手機(jī)屏幕的細(xì)菌數(shù)為_(kāi)_______個(gè)/cm2。該實(shí)驗(yàn)對(duì)照組該如何設(shè)置 ________________________________________________________________________。 解析：(1)微生物培養(yǎng)基的成分一般包括水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽。(2)據(jù)圖分析可知，該實(shí)驗(yàn)的接種方法為稀釋涂布平板法，用到的工具有酒精燈、移液管、涂布器、無(wú)菌水等。(3)不同的菌落形態(tài)、大小不同，圖示兩個(gè)電視臺(tái)調(diào)查的手機(jī)屏幕和馬桶按鈕都有多種形態(tài)的菌落，即存在多種微生物。兩電視臺(tái)實(shí)驗(yàn)操作均正確且完全一致，但報(bào)道結(jié)果截然不同，原因可能是手機(jī)的取樣和馬桶按鈕的取樣都不相同。 (4)根據(jù)提供的數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算，某手機(jī)屏幕的細(xì)菌數(shù)＝(48＋50＋52)31020.110(55)＝2104(個(gè)/cm2)。 答案：(1)氮源和無(wú)機(jī)鹽 (2)稀釋涂布平板　BCDE (3)形態(tài)、大小、隆起程度、顏色等　手機(jī)的取樣和馬桶按鈕的取樣都不相同 (4)2104　取培養(yǎng)基涂布0.1 mL無(wú)菌水進(jìn)行培養(yǎng) 9．為證明青霉素在某種細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性過(guò)程中所起的作用是選擇而非誘變，有如下實(shí)驗(yàn)方案。其中，平板影印指用無(wú)菌絨布輕蓋在已長(zhǎng)好菌落的原培養(yǎng)基上，然后不轉(zhuǎn)動(dòng)任何角度，“復(fù)印”至新的培養(yǎng)基上進(jìn)行接種。請(qǐng)回答： (1)圖中擴(kuò)大培養(yǎng)的過(guò)程中應(yīng)選用________培養(yǎng)基。利用________分離法可獲得A1培養(yǎng)皿上菌落。 (2)圖中②過(guò)程培養(yǎng)基的配方如下： 成分 無(wú)機(jī)鹽 蔗糖 葡萄糖 尿素 牛肉膏 水 瓊脂 酚紅 培養(yǎng)基 ＋ － ＋ ＋ － ＋ ＋ － 結(jié)合圖形分析________(“能”或“不能”)得出結(jié)論：該細(xì)菌可利用尿素作為氮源。理由是：____________________。 (3)B組培養(yǎng)基中還添加了適宜濃度的青霉素，結(jié)果如圖所示。欲證明青霉素所起的作用是選擇，則應(yīng)選取________(A.a1　B．a(chǎn)2　C．b1或b2或b3　D．任意一個(gè)菌落)菌落繼續(xù)培養(yǎng)在空白的A2培養(yǎng)皿中，待長(zhǎng)出菌落后影印到含相同濃度青霉素的C培養(yǎng)皿中。 (4)預(yù)測(cè)上述A2和C培養(yǎng)皿中菌落的生長(zhǎng)情況________(“相同”或“不同”)，由此證明青霉素所起的作用是選擇。 (5)下列關(guān)于微生物培養(yǎng)的敘述，正確的是(　　) A．實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所有器皿和培養(yǎng)基都必須用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌 B．實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中必須打開(kāi)超凈臺(tái)上的紫外燈和過(guò)濾風(fēng) C．涂布分離法，單菌落更易分開(kāi)，但操作更復(fù)雜 D．采用劃線分離時(shí)，在每次劃線前都需蘸取菌液一次 解析：(1)液體培養(yǎng)基具有進(jìn)行通氣培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)，在通氣或在振蕩的條件下，有利于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的攝入以及增加供氧量，所以有利于細(xì)胞生長(zhǎng)，提高微生物數(shù)量。故圖中擴(kuò)大培養(yǎng)的過(guò)程中應(yīng)選用液體培養(yǎng)基；菌種的分離常用涂布平板法。(2)由表格內(nèi)容可知，葡萄糖是碳源，尿素是氮源，但微生物也可能利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈?，故不能得出該?xì)菌可利用尿素作為氮源的結(jié)論；并且培養(yǎng)基中未加入酚紅指示劑，不能對(duì)菌種作進(jìn)一步的鑒定。 (3)欲證明青霉素所起的作用是選擇，菌種應(yīng)在未添加青霉素的培養(yǎng)基中選擇，即選擇a1菌落繼續(xù)培養(yǎng)在空白的A2培養(yǎng)皿中擴(kuò)大培養(yǎng)，待長(zhǎng)出菌落后影印到含相同濃度青霉素的C培養(yǎng)皿中。(4)如果A2和C培養(yǎng)皿中菌落的生長(zhǎng)情況相同，則證明變異是在接觸青霉素之前就已經(jīng)產(chǎn)生了，青霉素所起的作用是選擇。(5)培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌，接種環(huán)等用具可用灼燒滅菌，A項(xiàng)錯(cuò)誤；紫外線對(duì)人有傷害，如果超凈臺(tái)的玻璃關(guān)死，也沒(méi)必要開(kāi)吹風(fēng)，B項(xiàng)錯(cuò)誤；常用接種方法中的稀釋涂布平板法一般多用于篩選菌株，可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征，但由于需要多次稀釋，操作較復(fù)雜，C項(xiàng)正確；采用劃線分離時(shí)，在每次劃線前都要對(duì)接種環(huán)灼燒處理，目的是清除殘留的菌種，如果再蘸取菌液，將達(dá)不到稀釋的目的，D項(xiàng)錯(cuò)誤。 答案：(1)液體　涂布 (2)不能　該細(xì)菌可能利用氮?dú)庾鳛榈椿蚺囵B(yǎng)基中無(wú)酚紅，無(wú)法證明該細(xì)菌分解了尿素 (3)A (4)相同 (5)C