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實(shí)驗(yàn)二 鄰菲羅啉分光光度法測定水樣中的鐵——標(biāo)準(zhǔn)曲線法 一 、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模? 1．掌握鄰菲羅啉分光光度法測定微量鐵的原理和方法； 2．學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法及其使用。 二 、原理： 1.定量分析依據(jù)：A=κbc 2.有關(guān)反應(yīng)： 4Fe3++2NH2OHHCl=4Fe2++N2O↑+4H++2H2O+2Cl－ 橙紅色配合物 3.顯色條件 v pH值控制：pH≈5.0。 v 顯色時(shí)間：15min v 顯色溫度：室溫 v 顯色劑及用量：鄰二氮菲2.00mL 4.測量條件 λmax=510nm 參比溶液：試劑空白 吸光度范圍：0.2-0.8 三 、儀器： 可見分光光度計(jì)，1cm比色皿、100mL 容量瓶 1個(gè)，20mL 移液管 1 支，50mL 容量瓶 10 個(gè)， 10mL 吸量管 1 支，1mL 吸量管（或移液管） 1 支，5mL 移液管 1 支，2mL 移液管1 支。 四 、試劑： ①鐵貯備液（100g/mL）：準(zhǔn)確稱取0.7020克分析純硫酸亞鐵銨[（NH4）2Fe（SO4）26H2O]于100毫升燒懷中（或0.8640g分析純的NH4Fe(SO4)212H2O，其摩爾質(zhì)量為482.18g/mol），加50毫升1+1 H2SO4，完全溶解后，移入1000ml的容量瓶中，并用水稀釋到刻度，搖勻，此溶液中Fe的質(zhì)量濃度為 100.0g/mL。（實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備好） ② 鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液（20.00 μgmL－1） 移取 100.0μgmL－1鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液20.00mL于100mL容量瓶中，并用蒸餾水稀釋至標(biāo)線，搖勻。(學(xué)生自行配制) ③ 10%鹽酸羥胺水溶液：（用時(shí)配制）。 ④ 0.5%鄰菲羅啉水溶液：配制時(shí)加數(shù)滴鹽酸能助溶液或先用少許酒精溶解，再用水稀釋至所需體積。（臨用時(shí)配制）或（避光保存，兩周內(nèi)有效）。 ⑤ HAc-NaAc緩沖溶液（pH≈5.0）:稱取40克純醋酸銨加到50毫升冰醋酸中，加水溶解后稀釋至100毫升。 五、測定步驟： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： （1）分別吸取鐵的標(biāo)準(zhǔn)溶液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00ml于7支50ml容量瓶中，加水至刻度； （2）依次分別加入10%鹽酸羥胺溶液1ml，混勻，加入5ml pH≈5.0緩沖溶液，搖勻，加入0.5%鄰菲羅啉溶液2ml，搖勻， （3）放置15分鐘后，在510nm波長處，用1cm比色皿，以試劑空白作為參比，測定各溶液的吸光度。 附721型分光光度計(jì)操作過程： v 1.檢查儀器各調(diào)節(jié)鈕的起始位置是否正確，選擇波長，并將靈敏度檔置第1檔 v 2.接通電源，打開開關(guān) v 3蓋上比色皿暗盒蓋，用調(diào)“100%”調(diào)節(jié)器使電表指針處于透過率“100%”位，打開比色皿暗盒蓋，用調(diào)“0”調(diào)節(jié)器使電表指針處于透過率“0”位；預(yù)熱20min v 4.放入?yún)⒈热芤杭霸嚇尤芤? v 5.校準(zhǔn)：拉動(dòng)吸收池拉桿，使參比溶液置于光路中，打開比色皿暗盒蓋，用調(diào)“0”調(diào)節(jié)器使電表指針處于透過率“0”位；蓋上比色皿暗盒蓋，用調(diào)“100%”調(diào)節(jié)器使電表指針處于透過率“100%”位。重復(fù)校正至穩(wěn)定 v 6.若調(diào)“100%”調(diào)節(jié)器不能使電表指針處于透過率“100%”位，打開比色皿暗盒蓋，則應(yīng)放大靈敏度，重新調(diào)整直至穩(wěn)定 v 7. 蓋上樣品蓋，拉動(dòng)吸收池拉桿，依次將待測溶液推入光路，讀出吸光度值A(chǔ)。連續(xù)讀數(shù)后，立即打開比色皿暗盒蓋,取出吸收池，參比溶液不取出。 v 8.再放入其他濃度待測溶液，繼續(xù)調(diào)“0”及”100%”，按前面的“校準(zhǔn)”步驟重新調(diào)整直至穩(wěn)定，再測量其他濃度待測溶液的吸光度A。 v 9.測量完畢，取出吸收池，各旋鈕置于原來位置，電源開關(guān)置于“關(guān)”，拔下電源插頭。 v 10.比色皿用純水洗凈后倒置于濾紙上晾干。 （4）以吸光度為縱坐標(biāo)，鐵含量（g，50ml）為橫坐標(biāo)，用軟件（excel或origin）繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。 編 號 0# 1 # 2 # 3 # 4 # 5 # 6# V（鐵標(biāo)液）/mL 0.00 1.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 ρ（Fe）/μgmL－1 A 2、試樣中鐵含量的測定 取3只潔凈的50mL容量瓶，分別加入適量（以吸光度落在工作曲線中部為宜）含鐵未知試液5.00mL，按步驟（前面步驟1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制）顯色，測量吸光度并記錄，由線性回應(yīng)方程式求出相應(yīng)的鐵含量。（記錄格式參考下表）。 六．注意事項(xiàng) （1）顯色過程中，每加入一種試劑均要搖勻。 （2）試樣和工作曲線測定的實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)保持一致，所以最好兩者同時(shí)顯色同時(shí)測定。 七．思考題 （1）T與A兩者關(guān)系如何？分光光度測定時(shí)，一般讀取A值，該值在標(biāo)尺上什么范圍好？為什么？如何控制被測溶液的A值在此范圍內(nèi)？