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歡迎進(jìn)入生物課堂 一 2基因工程的基本操作程序 DUCK179制作 復(fù)習(xí) 基因工程的基本操作步驟 提取目的基因 目的基因與運(yùn)載體結(jié)合 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 目的基因的表達(dá)和檢測(cè)看課本P8的圖 DUCK179制作 一 目的基因的獲取 1 目的基因 主要指的是編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 也可以是一些具有調(diào)控作用的因子2 獲取方法 1 從基因文庫中獲取目的基因 2 人工合成例 利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 DUCK179制作 從基因文庫中獲取目的基因 什么叫基因文庫 將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷 導(dǎo)入到受體菌的群體中 各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因 稱為基因文庫 DUCK179制作 基因組文庫與部分基因文庫的關(guān)系 DUCK179制作 基因文庫的構(gòu)建模式圖 通過對(duì)受體菌的培養(yǎng)而儲(chǔ)存基因 DUCK179制作 如何從基因文庫中得到所需要的基因 依據(jù) 目的基因的有關(guān)信息 如 根據(jù)基因的核苷酸序列基因的功能基因在染色體上的位置基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性 DUCK179制作 利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 PCR 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 是以DNA變性 復(fù)制的某些特性為原理設(shè)計(jì)的前提條件是必須對(duì)目的基因有一定的了解 需要設(shè)計(jì)引物 DUCK179制作 PCR技術(shù)原理及反應(yīng)過程 原理 DNA雙鏈復(fù)制 反應(yīng)過程 1加熱至90 95 目的基因DNA解鏈2冷卻至55 60 引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈3加熱至70 75 熱穩(wěn)定DNA聚合酶從從引物起始互補(bǔ)鏈的合成 DUCK179制作 DUCK179制作 二 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 1 基因表達(dá)載體的組成 復(fù)制原點(diǎn)目的基因啟動(dòng)子終止子標(biāo)記基因等 思考 作為基因工程表達(dá)載體 只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎 為什么 DUCK179制作 啟動(dòng)子 位于基因的首端的一段特殊的DNA片斷 它是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位 有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA 最終獲得蛋白質(zhì) 調(diào)節(jié)基因 操縱基因 結(jié)構(gòu)基因 RNA聚合酶 半乳糖苷酶 酶 酶 啟動(dòng)子 結(jié)構(gòu)蛋白基因 RNA聚合酶 DUCK179制作 終止子 位于基因的尾端的一段特殊的DNA片斷 能終止mRNA的轉(zhuǎn)錄 標(biāo)記基因的作用是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因 從而將有目的基因的細(xì)胞篩選出來 DUCK179制作 總結(jié) 表達(dá)載體需由哪幾部分組成 復(fù)制原點(diǎn)啟動(dòng)子目的基因終止子標(biāo)記基因 它們的作用是 DUCK179制作 三 目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 1 導(dǎo)入植物細(xì)胞常用的方法是什么 具體過程是怎樣的 2 導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞常用的方法是什么 基本操作程序是怎樣的 3 導(dǎo)入大腸桿菌的方法是怎樣的 鈣離子有什么作用 哪些細(xì)胞可以作為目的基因的受體 DUCK179制作 1 導(dǎo)入到植物細(xì)胞常用的方法有農(nóng)桿菌感染法 雙子葉植物和祼子植物 基因槍法 單子葉植物 和花粉通道法2 導(dǎo)入到動(dòng)物細(xì)胞常用的方法是顯微注射法 先提純目的基因 再體外注射入卵細(xì)胞或受精卵中 最后將含目的基因的受精卵移植到輸卵管或子宮中發(fā)育成新個(gè)體 3 導(dǎo)入到大腸桿菌 原因 時(shí)先用Ca2 處理成感受態(tài)后與溶有載體DNA的緩沖液混合 吸收DNA分子 完成轉(zhuǎn)化 DUCK179制作 DUCK179制作 四 目的基因的檢測(cè)與鑒定 導(dǎo)入目的基因后需要檢測(cè)哪些方面 各采取什么方法 什么是DNA分子探針 檢測(cè)時(shí)的DNA探針通過什么原理來檢測(cè)目的基因和相應(yīng)的mRNA 利用抗體 抗原雜交檢測(cè)的原理是什么 DUCK179制作 四 目的基因的檢測(cè)與鑒定 1 分子水平的檢測(cè) 分子雜交技術(shù)2 個(gè)體生物學(xué)水平的簽定 DUCK179制作 同學(xué)們 來學(xué)校和回家的路上要注意安全 同學(xué)們 來學(xué)校和回家的路上要注意安全